[发明专利]一种快速高效测定葡萄酒中酚酸的方法

说明书

技术领域

一种快速高效同时测定葡萄酒中13种酚酸的方法，属于葡萄酒风味物质分析技术领域。

背景技术

酚酸类物质是葡萄酒中一类重要的酚类化合物，这类化合物具有一个苯核，主要为对羟基苯甲酸和对羟基肉桂酸的衍生物，包括没食子酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸、绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等。越来越多的研究表明，酚酸类物质是一类具有独特的保健作用的生物活性物质，具有抗氧化、清除自由基、抑制突变和抗肿瘤、抗血小板凝集、促进前列腺素的释放、抗菌、抗病毒、止血、增高白血球，缩短血凝和出血时间等重要的生理功能。此外，酚酸与葡萄酒的品质也有着密切的关系。在葡萄酒中，酚酸（如咖啡酸、香豆酸等）可与花色素和酒石酸相结合，从而影响着葡萄酒的色度与颜色稳定性。没食子酸是主要的对羟基苯甲酸类酚酸，是葡萄酒中氧自由基清除能力的主要承担者。咖啡酸是主要的对羟基肉桂酸，同样是葡萄酒中氧自由基清除能力的主要承担者之一。葡萄酒中酚酸类物质的研究一直是国内外葡萄酒研究的一个热点。

目前，酚酸的分析测定方法主要有紫外法、薄层色谱法，高效液相色谱法（HPLC），毛细管电泳法，气相色谱法以及液质、气质联用等。紫外法由于样品中伴随着其他酚类物质的存在，酚酸和其他酚类物质等在相同波长下均有较强的吸收，因此测定值一般偏高；而纸层析法、薄层层析法在分离效果、速度、定量准确度等方面存在缺陷；气相色谱法用于酚酸类物质的分离，测定速度快，灵敏度高，但该方法需衍生化处理，前处理比较繁琐，且不适于大分子质量物质；高效毛细管电泳法则存在着重现性较差、线性范围窄和灵敏度较低等缺点。高效液相色谱法仍是目前应用最为广泛的一种检测方法，但利用HPLC检测葡萄酒中酚酸仍存在检测时间长，流动相消耗量大等缺点。陈建业等在《中国食品学报》2006年第6期的“葡萄酒中11种酚酸的反相高效液相色谱测定方法研究”公开了葡萄酒中酚酸的检测，但只检测到葡萄酒中11种酚酸物质，检测时间长达53分钟，并且有部分物质分离效果较差。目前基于HPLC的酚酸测定方法并不能快速高效的对葡萄酒中酚酸进行定性和定量分析。

发明内容

本发明为解决现有的酚酸测定方法存在成本高，检测时间长等问题，提供了一种利用超高效液相色谱仪对葡萄酒中酚酸进行定性、定量分析的方法。

本发明的技术方案：一种快速高效测定葡萄酒中酚酸的方法，利用超高效液相色谱UPLC和二极管阵列检测器同时对葡萄酒中13种酚酸进行定性和定量分析：

所述检测13种酚酸，分别为：没食子酸、原儿茶酸、龙胆酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、香草酸、丁香酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸、鞣花酸、水杨酸；

（1）标准溶液配置：

分别精确称取所述13种酚酸各10.0-15.0mg，用甲醇溶解并转移至10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，封口，作为标准贮备液，在-20℃保存备用；使用前，根据实验需要将此标准贮备液用甲醇稀释至适宜含量，以配制标准工作液和混合标准工作液；

（2）葡萄酒样品经过0.45μm滤膜过滤，用于进行检测分析；

（3）超高效液相色谱分离检测条件：

检测仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪，包括四元溶剂管理器（QSM），样品管理器（SM-FTN），色谱柱温箱，光电二极管阵列检测器（PDA）；

色谱柱：美国Bridge Ethylene Hybrid (BEH) C18色谱柱(100 mm × 2.1 mm，1.7 μm，Waters)，或同类UPLC C18色谱柱；

流动相A：乙酸:水为2:98，v/v，即2%乙酸水；

流动相B：甲醇；

流速：0.3 mL/min；

洗脱程序：0-3.2 min，A为92％-80％，B为8％-20％；3.2-8 min，A为80％-56％，B为20％-44％；8-8.2 min，A为56％-92％，B为44％-8％；8.2-10 min，A为92％，B为8％；

检测波长：龙胆酸为320 nm，其余均为280 nm；

柱温50℃，进样量为1 μL，以峰面积外标法定量；

紫外检测器的选择：选用二极管阵列检测器；

（4）定性：