[发明专利]一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的效力检验方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽用灭活疫苗的效力检验方法，尤其涉及一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力的检验方法，属兽用生物制品检验技术领域。

背景技术

鸭出血性卵巢炎（Duck Hemorrhagic Ovaritis，DH）是新近流行的、急性、高度接触性的一种新型鸭传染病，其病原为鸭出血性卵巢炎病毒（Duck Hemorrhagic Ovaritis Virus，DHOV），在病毒分类上属于黄病毒科的成员，感染不同日龄鸭，引起性成熟鸭卵巢出血、睾丸萎缩、产蛋量、受精率和孵化率下降，鸭死淘率增加。

在病毒分类地位的研究中，通过对分离病毒株的F4代鸭胚传代病毒的基因组序列与已知的病毒进行序列同源性分析和进化分析，发现该病毒与黄病毒科黄病毒属的坦布苏病毒的遗传距离最近。在诊断方面，曹贞贞、万春和、苏敬良、滕巧泱等人报道可以采用临床症状、大体及组织病理变化、PCR扩增和病毒分离等方法确诊该病。关于该病的防控，北京市农林科学院和瑞普（保定）生物药业有限公司、齐鲁动物保健品有限公司、福建省农业科学院畜牧兽医研究所和重庆市农科院畜牧兽医研究所报道了利用该病暴发期间所分离的毒株制备疫苗的方法。林健、刘月焕等报道了利用产蛋鸭成功建立了鸭出血性卵巢炎的人工感染模型，为疫苗的评价奠定了实验基础。尚未见有客观、可行、操作性强和科学的疫苗效力评价方法的详细报道。

发明内容

本发明目的之一是提供一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力评价鸭的日龄范围和性别。

本发明目的之二是提供鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力评价用疫苗免疫次数、采用时间、采集的组织样本、攻毒途径和检验用胚。

本发明目的之三是提供一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力评价方法。

本发明所用病毒毒株命名为鸭出血性卵巢炎病毒HB株，保藏号为CCTCC V201122；所述鸭出血性卵巢炎病毒是ssRNA病毒，有囊膜，能够凝集鸽红细胞；病毒颗粒大体呈球状，直径40～60nm；所述病毒对外界环境的抵抗力较强，在4℃中存放几周，在-20℃中存放几个月，其感染力均不受影响；所述病毒对乙醚、氯仿敏感；大多数去污剂能将它迅速灭活；在37℃条件下，用0.1％福尔马林熏蒸6h便可把它灭活。该病毒可在9～13日龄鸭胚尿囊腔、胚绒毛尿囊膜，9～10日龄鸡胚尿囊腔、胚绒毛尿囊膜，6日龄鸡胚卵黄囊，7～8日龄鸭胚卵黄囊中培养，也可在鸭胚成纤维细胞和BHK21细胞上培养。

本发明所用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的制备方法已于2011年申报发明专利，申请号为201110255115.1。

本发明提供一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验方法，该方法使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫鸭，共免疫2次，首免后2周进行二免，二免后3~5周用鸭出血性卵巢炎病毒对免疫鸭进行攻毒；攻毒后5～10日将试验鸭处死，进行剖检，观察生殖系统的大体病变，免疫组鸭的生殖器官未发生病变的攻毒保护率为70%以上判为疫苗效力检验合格；所述的大体病变在雌鸭表现为雌鸭卵泡出血、变形或输卵管萎缩，在雄鸭表现为睾丸或输精管萎缩。

进一步地，本发明方法根据易感性实验结果，确定鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验用鸭的日龄为120~560日龄。

优选地，效力检验用鸭的性别为雌性。

其中，2次免疫鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的剂量为0.5ml/只～2ml/只。

其中，攻毒用鸭出血性卵巢炎病毒为DHOV-HB株（保藏编号为CCTCC V201122，已在申请号为201110255115.1的中国专利中公开），攻毒剂量为3×10⁴ELD₅₀。

其中，所述的鸭为肉用鸭、蛋用鸭或SPF鸭。

进一步地，本发明提供了一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验方法，该方法使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫42～560日龄雌鸭，首免后2周进行二免，两次的免疫剂量均为0.5~2ml/只；二免后3~5周用DHOV-HB株攻毒，攻毒途径为口服、肌注或静脉注射，攻毒剂量为3×10⁴ELD₅₀，攻毒后5～10日将试验鸭处死，进行剖检，观察生殖系统的大体病变，免疫组鸭的生殖器官未发生病变的攻毒保护率为70%以上判为疫苗效力检验合格；所述的大体病变表现为雌鸭卵泡出血、变形或输卵管萎缩。

其中，所述的鸭为肉用鸭、蛋用鸭或SPF鸭。