[发明专利]一种劲直黄芪多糖的提取分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种劲直黄芪多糖的提取分离方法。

背景技术

劲直黄芪是豆科黄芪属多年生的有毒草本植物，是黄芪属危害最大的疯草之一。劲直黄芪内含苦马豆素0.006％(苦马豆素有抗肿瘤的作用，还具有免疫增强和抗辐射双重作用)，家畜误食一定量后，会导致中毒死亡，影响繁殖，妨碍畜种改良，严重威胁着草地畜牧业的发展，毒草的蔓延生长还破坏了草地生态，同时富含粗蛋白、粗脂肪、矿物元素和多种氨基酸，是一种潜在的牧草资源。西藏的疯草覆盖度约占45％，其中劲直黄芪占15％，因其独特的生物学特性(抗旱、抗寒、抗病虫害、耐风沙、耐贫瘠，恶劣环境中亦能旺盛生长)以及分布区域生态环境的特点，几乎不可能彻底灭除。因此应当看作是特定草原生态群落的重要组成部分，把研究重点转移到开发利用上。

近年来，随着一些植物多糖在免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗辐射、抗病毒和抗衰老等方面独特功效的研究开发，且多糖来源广泛、无毒、无副作用，所以其在医药业、食品业、化工业方面的巨大开发前景，引起越来越多国内外科研工作者的兴趣，并成为21世纪世界生命科学研究的热点。但由于植物源多糖种类的多样性、结构组成的复杂性以及多糖分子量大、极性大等特点，给植物多糖提取、分离带来很大困难，所以选择一种合适的提取分离方法对植物多糖的开发利用具有重大的意义。目前，常规的多糖提取分离采用水煮醇沉法，水煮温度都在100℃，对多糖的选择性不好，可把黄芪中的黄酮、皂甙等同时提取出来，在后续工艺中又不能把它们分离出来，并且浪费能源和资源，经济效益低。

发明内容

本发明目的是为了优化劲直黄芪多糖的提取分离工艺，为劲直黄芪的进一步开发利用及生态防制提供理论支撑。

为了实现本发明的目的，采用如下技术方案：

劲直黄芪多糖的提取分离方法，提取方法：超声时间10min、超声温度80℃、料液比1∶25(g∶ml)、超声功率350W、提取次数2次、溶液pH为9，；分离方法：用无水乙醇，沉淀3h，5倍体积的乙醇加入量。

本发明运用超声波法进行提取，操作简便、节约溶剂、提取率高、对多糖结构破坏小等优点，是一种快速、高效的中药提取新方法。利用正交实验设计，通过少量有代表性的实验，综合考察多种因素对提取分离的影响，实验结果的可靠性高。最终确定了劲直黄芪多糖的最佳提取分离工艺，这为分布于西藏自治区的毒草劲直黄芪的进一步开发利用及生态防制提供了理论依据。本发明可明显提高劲直黄芪多糖的提取率，是传统提取工艺的1.46倍。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

提取的步骤如下：将劲直黄芪地上部分采集后，自然风干、粉碎，准确称取0.5g，置于离心管中，利用L₁₆(4⁴×2³)混合正交设计方案、超声波法进行提取，过滤，滤液定容、摇匀，采用硫酸-苯酚法来测定劲直黄芪多糖的含量，计算粗多糖的提取率(提取率(％)＝(劲直黄芪多糖提取液的浓度(mg/mL))×定容体积(mL)×稀释倍数×10^-3)/劲直黄芪粉末的质量(g)×100％)，见表1。

分离步骤如下：利用最优提取方案进行提取，将提取液抽滤，浓缩，加入3％的三氯乙酸，3000r/min离心10min去除蛋白，按L₉(3⁴)正交实验设计方案进行分离，所得沉淀3000r/min离心10min，再用无水乙醇、丙酮清洗，低温干燥得粗多糖，准确称重。用蒸馏水溶解粗多糖，定容、摇匀，计算粗多糖的提取率(表2)。

得出劲直黄芪多糖的最佳提取分离工艺：超声时间10min、超声温度80℃、料液比1∶25(g∶ml)、超声功率350W、提取次数2次、溶液pH为9，提取的劲直黄芪多糖收率最高，达8.927％，是传统水提法的1.46倍；最佳分离组合是用无水乙醇，沉淀3h，5倍体积的乙醇加入量，提取率达到1.993％。

验证实验：称取劲直黄芪粉末0.5g3份，按照上述最优的提取工艺条件进行验证试验，结果劲直黄芪多糖的平均提取率为8.900％；利用最优的分离工艺进行验证实验，得出劲直黄芪多糖的提取率为1.978％。验证实验结果与最佳提取分离工艺一致，表明所用的提取分离工艺方法可行、稳定、重现性好。

表1超声波法提取劲直黄芪多糖的正交实验L₁₆(4⁴×2³)设计及结果