[发明专利]检测自身免疫性肝病相关抗体ANA的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其是涉及一种检测自身免疫性肝病相关抗体ANA的试剂盒，本发明还涉及使用该试剂盒检测ANA的方法。

背景技术

    自身免疫性肝病(autoimmune liver diseases)主要包括三种与自身免疫密切相关的、以肝胆损伤为主的疾病：自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)、原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)和原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)。AIH是一种伴循环自身抗体和高免疫球蛋白血症、病因未明、呈慢性炎性坏死的肝脏疾病，PBC是以自身免疫介导的肝内胆管损伤、以后呈肝纤维化、最终导致肝功能衰竭为特征的一类病因不明的自身免疫性肝脏疾病，PSC是一种原因不明的慢性综合征，其特征是肝外和/或肝内胆管弥漫性炎症及纤维化所引起的慢性胆汁淤积症。

近年来，国际上对自身免疫性肝病基础与临床的研究高度重视，并且进展迅速，主要涉及自身免疫性肝病的发病机制、遗传背景、相关自身抗体及其靶抗原性质、临床流行病学、临床诊断及治疗和预后等方面。自身免疫性肝病的诊断主要依靠病史、临床表现、体征和实验室检查结果。肝组织病理学检查被认为是AIH，PBC诊断的“金标准”，但此项检查临床应用具有局限性，例如，自身免疫性肝病的肝活检组织病理学表现特异性不强，非自身免疫性肝病所特有；患者不愿或不适接受此项创伤性检查；此外，目前多数医院采用B超引导下细针穿刺取材进行肝组织病理学检查，此检查受取材标本局限，是否能取得病变组织，对检查结果影响很大。尽管如此，肝组织病理学检查对自身免疫性肝病诊断、鉴别诊断及病变程度的判断至关重要，仍是诊断的重要标准之一。AIH，PBC早期病变(胆管炎期、慢性胆汁淤积期)属临床治疗可逆转期或可部分逆转期；而后期或终末期(肝纤维化/肝硬化期、肝衰竭期)属临床治疗不可逆转期，愈后不佳。因此，早期诊断、早期治疗尤为重要。自身免疫性肝病发病机制与免疫功能异常密切相关，自身抗体在发病机制中起重要作用。每种自身免疫性肝病都具有特征性自身抗体谱，自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断、分型及鉴别诊断具有重要意义。近年来，国外对自身免疫性肝病相关自身抗体谱靶抗原性质、临床诊断应用价值(尤其是无症状期的早期诊断)、与疾病临床特点及活动性的关系等方面研究进展迅速，有关自身抗体谱的研究已引起临床高度重视，自身抗体检测已成为自身免疫性肝病临床诊断的常规检查项目。

近年来，由于临床经验的积累和实验室诊断技术的进步，发现我国人群中自身免疫性肝病患者逐渐增多。国内有关自身免疫性肝病的发病机制、相关自身抗体靶抗原、病例报道、临床病例讨论和临床病理分析的文章逐渐增多，以上的工作说明自身免疫性肝病在中国并不少见。

ANA（抗核抗体）是AIH最常见的自身抗体之一，约有75％的I型AIH患者ANA阳性，而且有10％的AIH患者，ANA是其血清中唯一可检测到的自身抗体。但ANA并不具有诊断特异性，不仅可见于AIH，也可见于多种结缔组织病。ANA在AIH中的滴度一般较高，通常超过1：160。典型I型AIH其ANA阳性，且滴度明显升高(成人≥1：80，儿童≥1：40)。临床上常用间接免疫荧光法 (IIF)检测患者中出现的ANA，其实验基质通常为不同灵长类动物的肝脏、胃、肾脏组织冰冻切片，含有完整的抗原谱，但是对间接免疫荧光分析法着染得鉴定具有一定的主观性，因而对结果的解释可能在不同时间点、不同观察者之间、新老组织切片之间存在差异，并且需要荧光显微镜等仪器的辅助，在一般的中小医院难以开展。所以，目前对抗核抗体(ANA)的诊断方法还需进一步的改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可准确检测自身免疫性肝病相关抗体ANA的试剂盒，本发明另一目的是提高使用该试剂盒检测抗核抗体的方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的检测自身免疫性肝病相关抗体ANA的试剂盒，包括固相载体，酶标二抗工作液，阳性对照品，阴性对照品，校准品，样品稀释液，底物和洗涤液，所述固相载体为微孔板、磁微粒或磁球等可以与抗核抗体靶抗原进行物理吸附或进行化学连接的载体；所述酶标二抗工作液中所用二抗为鼠或羊或兔抗人IgG或/和抗人IgM或/和抗人IgA，所用二抗标记物为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶，吖啶酯、异鲁米诺或稀土元素。