[发明专利]酶法甘油三酯测定方法及测定试剂

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种酶法甘油三酯测定方法及测定试剂。

背景技术

甘油三酯（Triglyceride，TG）是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用TG分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行TG的合成，在脂肪组织中贮存。

中华医学会检验分会于1995年推荐两步酶法作为血清TG常规测定方法，该法用脂蛋白脂肪酶（LPL）水解TG生成甘油和脂肪酸；水解后的甘油和三磷酸腺苷（ATP）在甘油激酶（GK）和甘油磷酸氧化酶（甘油-3-磷酸氧化酶GPO）的催化下生成H₂O₂，在过氧化物酶（POD）催化下，H₂O₂，4氨基安替比林（4-AAP）和2,4-二氯酚（也有使用4-氯酚、苯酚的衍生物、苯胺盐和苯磺酸盐，下面就以2,4-二氯酚为代表叙述，其他色原不再重复提起，）形成有色染料（常为醌亚胺类），这些物质的生成量与样本中的TG含量成正比，最后通过分光光度法计算出相应的TG浓度。具体反应见化学反应式1~4。

此法具有操作简便快速，精密度高，特异性强，反应线性范围宽，易达到终点，可以消除脂血、溶血、黄疸干扰等优点，可以作为双试剂使用，也可以将两种试剂合在一起作为单试剂使用。但，由于血清中TG水解后产生的甘油以及血清中原有的游离甘油都参与了反应，所以用单试剂测定的是血清总甘油酯（定义为TG和游离甘油及少量甘油二酯、甘油一酯之和，习惯统称为TG），其反应结果不能真实反应血清中TG的含量。

为了去除游离甘油干扰，现有技术中解决该问题采用的方案有：（1）以4-AAP和LPL组分为试剂2，其余成分均加入试剂1中。此法通过加入试剂1后的第一步预孵育期，将游离甘油转化为无色的2,4-二氯酚的二聚体和苯氧自由基。在加入试剂2后，血清中的TG在脂蛋白脂肪酶的催化下经过化学反应式（1）-（4）的反应最终转化为红色醌亚胺，但由于2,4-二氯酚的二聚体不稳定，加入试剂,2后，在4-AAP存在的情况下，2,4-二氯酚的二聚体及苯氧自由基也转化为红色醌亚胺，所测的醌亚胺实际还是游离甘油和TG产生的醌亚胺之和。（2）双色原物质同在试剂1中，试剂2仅含有LPL有效成分。此方案中游离甘油和TG水解产生的甘油先后呈色，仪器以第一步反应产生的醌亚胺为空白，仅以第二步产生的醌亚胺计算出TG含量，以此去除游离甘油的影响，但由于游离甘油产生的吸收信号较低且不稳定，因此该法试剂准确度、精密度较差，临床结果重复性不好，无法满足常规检测要求。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，提出一种可以避免原来以过氧化物酶氧化H₂O₂造成不稳定地本底升高的、准确度和精密度较差现象的出现，而是可以通过过氧化氢酶氧化游离甘油反应产生的H₂O₂、生成无色的水和氧气，并由试剂中的抑制剂抑制过氧化氢酶，使得检测结果准确度、精密度好的酶法甘油三酯测定方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种酶法甘油三酯测定方法，利用酶法甘油三酯测定试剂的试剂1中的过氧化氢酶消除游离甘油产生的H₂O₂，进而由试剂2中的过氧化氢酶抑制剂抑制试剂1中的过氧化氢酶，从而测定样本中TG含量的方法，反应过程如下：

第一步反应

第二步反应

抑制剂抑制过氧化氢酶活性                             （4）

本发明还提供一种上述酶法甘油三酯测定方法的测定试剂，该试剂由试剂1和试剂2组成，其中试剂1、试剂2中的各组分及组分浓度范围为：

试剂1：

试剂2：

本发明上述的试剂可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用；上述试剂的配置均采用行业常规技术。