[发明专利]一种抗EV71病毒寡核苷酸的结构和用途

说明书

技术领域：

本发明涉及生物工程药物领域，具体地说是一种固相合成的寡核苷酸的序列、结构及其在治疗EV71(肠道病毒71型)病毒(Human enterovirus 71)感染相关疾病中的用途。

背景技术

EV 71病毒感染性强且致病率高，尤其是神经系统方面的并发症。该病易于传播，容易发生流行，预防控制难度大。20世纪70年代中期，保加利亚、匈牙利等国家相继暴发以中枢神经系统疾病为主要临床特征的EV71型手足口病流行，并导致较高的病死率和致残率。1997年以来，EV71感染为主的手足口病在马来西亚、中国台湾、新加坡等地大规模暴发流行。1998年中国台湾发生迄今最大的一次主要为EV71型手足口病流行，共报告129106例手足口病或疱疹性咽峡炎病例，其中重症患1405例，死亡78例。中国内地自1981年在上海始见本病，此后北京、河北、天津、福建、吉林、山东、湖北及广东等十几个省市均有EV71型手足口病的发生和流行。特别值得注意的是近年来本病流行有蔓延增多趋势。2008年3月10日至5月31日短短时间内安徽阜阳共报告手足口病7470例，共发现111例重症病例，其中死亡23例，病死率0.31％。目前EV71病毒感染无特殊治疗药物，故临床上对无并发症患者之治疗只能采取支持性疗法，而对有并发症的患者也只能对症治疗，采取一些降颅压、降温、辅助抗病毒等的治疗。因此，研究特异性高、毒副作用小的新型抗EV71病毒感染的药物对治疗与预防EV71病毒感染及其相关性疾病具有重要现实意义。

核酸类药物是一类全新的基因靶向创新药物，长期以来一直是国际研究的热点，特别是近几年小核酸的发现进一步将核酸药物的研究推向一个前所未有的发展高潮。

反义寡核苷酸是一类经过人工合成的寡核苷酸片段，长度多为15～30个核苷酸。通过碱基互补的原理，干扰相关基因的转录和翻译，或者整个基因组的复制，其优点在于其理论上的高度靶特异性，是一种理想的具有精确选择性的基因靶向治疗药物。由于反义寡核苷酸作用的高度特异性，因此被认为是极具潜力的抗肿瘤和抗病毒新药。国外已有一些著名制药企业已将反义药物作为其新药研究开发的重点方向之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种阻断EV71病毒复制、抑制病毒致病的寡核苷酸序列、结构及其药物。

本研究的内容是针对EV71病毒保守序列，利用网上服务器Soligo设计了5条寡核苷酸(表1)，从设计的这5条20个碱基长度的寡核苷酸序列中进行初步筛选。结果显示靶向EV71的5’非编码区保守序列EV5抑制病毒所致细胞病变作用最佳，EV2次之。在RD细胞系中评价结果显示EV5可特异且剂量依赖性地抑制EV71病毒的复制及致细胞病变作用。在EV71感染小鼠模型评价结果显示EV5在小鼠体内能够显著的抑制EV71病毒感染死亡率，缓解EV71病毒感染引起的小数体重增加缓慢以及抑制EV71病毒复制的作用。

表1寡核苷酸序列及结构特征

根据本发明，针对EV715’非编码区的寡核苷酸EV5能特异性抑制EV71病毒的感染复制，有可能成为治疗及预防EV71病毒感染相关疾病的新型生物工程药物。

根据本发明，针对EV715’非编码区的寡核苷酸能有效的抑制EV71病毒的复制并保护细胞使其免于EV71病毒感染所致细胞病变，是一种特异性高、毒副作用小的新型抗EV71病毒的潜在药物。

根据本发明，反义寡核苷酸的长度与其细胞通透性，与靶序列结合亲和性及作用特异性等因素相关，EV5的长度根据实验确定，本发明包含了与EV5具有相同序列的任何长度寡核苷酸。

根据本发明，为增强反义寡核苷酸的核酸酶抗性、生物利用度及组织靶向性等，本发明包含了EV5的硫代修饰。

根据本发明，反义寡核苷酸的长度与其细胞通透性，与靶序列结合亲和性及作用特异性等因素相关，EV5的长度根据实验确定，本发明包含了与EV5具有60％及其以上连续相同序列的任何长度寡核苷酸。

根据本发明，为了进一步验证EV5的特异性效果，本发明包含了EV5序列的3’端及5’端的脂肪链修饰。

根据本发明，本发明的寡核苷酸可按本领域已知方法配成药物制剂。

根据本发明，本发明的治疗组成，依不同情况包括特定药物的药物动力学、药代动力学、给药模式、给药途径、受者的年龄、体重、肝肾功能状态、疾病的性质、程度及治疗时限等，以适宜的剂量给药。

本发明的实施对严重危害人类健康的EV71病毒感染的治疗具有重要的社会效益和经济效益。

附图说明：