[发明专利]一种夹竹桃叶的气孔窝叶表皮的制片方法

说明书

技术领域

[0001] 技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种夹竹桃叶的气孔窝叶表皮的制片方法。

背景技术：

夹竹桃（Nerium indicum Mill.）是夹竹桃科（Apocynaceae）一种常见植物，在《植物学》、《植物生物学》和《植物解剖学》等各类教科书与实验教材中，几乎都是以夹竹桃的叶片结构作为旱生植物的典型叶来讲述。

夹竹桃叶的上、下表皮都是复层表皮，其气孔器只生长在下表皮下陷于叶肉组织内的气孔窝中，在下表皮表面只能看见气孔窝的开口，无法观察到气孔器及其周围表皮。通常只能通过夹竹桃叶的横切片观察到其气孔窝与气孔器的纵切结构，无法观察到气孔窝内叶表皮的细胞形状与气孔器构成。由于夹竹桃叶气孔窝的这种特殊结构，使得各类叶表皮制片方法均无法获得其气孔窝的叶表皮制片，夹竹桃气孔窝的叶表皮制片因此成为叶表皮制片技术上的一个难题。

发明内容：

为克服以上现有技术的缺点，本发明提供一种操作简单，能够观察到夹竹桃气孔窝内的叶表皮细胞形状与气孔器构成的制片方法。

为达到上述目的，本发明提供一种夹竹桃的气孔窝叶表皮的制片方法，所述方法为取材和制片，包括夹竹桃叶的横切制片和气孔窝底部的叶表皮制片。

夹竹桃叶的横切制片的具体步骤如下：

1）将新鲜的夹竹桃叶放在解剖镜的视野中，先将叶片不需要观察的部分切去，使叶片宽度约为1-1.5 cm；

 2）沿着与叶片纵轴不平行或平行的方向，用锋利刀片对叶片进行连续横切；

3）切片后，用尖头镊子将切片依次转移到载玻片上，制成水装片，或经过浅染，经冲洗后制片。

夹竹桃叶的气孔窝底部的叶表皮制片的具体步骤如下：

1)截取适当长度的新鲜夹竹桃叶将其上表皮朝上，放置在解剖镜的视野中，透射光照明并适当放大，选择操作区域；  

2) 用1mL注射器的针尖将上表皮划破，再将上表皮及其浅层的叶肉组织轻轻挑、刮去；同时在操作表面上及时滴上1-2滴水，或将叶片放入水中洗去刮下残渣并进行补水；

3)当上表皮及部分浅层叶肉组织被除去后，用1mL注射器的针尖挑、刮去各种大小的叶脉及气孔窝周围的叶肉组织；与此同时，利用针尖前端的倾斜面轻轻地刮过气孔窝叶表皮上的叶肉组织，以便将气孔窝叶表皮上附着的海绵组织顺势轻轻地刮去；

4)当制片区域的绝大部分叶肉组织被挑、刮去后，将此制片区域剪下，转移到载玻片上，将其下表皮的表面朝下制成水装片，即可观察和照相；

5)将叶表皮转移到载玻片上后，滴上水和染液进行浅染，使气孔窝周围的细胞颜色较气孔窝叶表皮细胞的颜色稍浅，且气孔窝叶表皮的染色不要太深；染色时，在载玻片上罩上防染色液蒸发的培养皿；染色后，经过漂洗，将下表皮的表面朝下制成水装片，即可观察和照相。

夹竹桃叶横切制片和气孔窝底部的叶表皮制片过程中，浅染的染液均可以是0.1%番红水溶液、0.1%固绿染液或其他染液。

夹竹桃叶横切制片和气孔窝底部的叶表皮制片过程中浅染，其进行染色时0.1%番红水溶液浅染的时间均可以是5-10分钟,或根据染色效果，适当缩短或延长染色时间

夹竹桃叶横切制片和气孔窝底部的叶表皮制片过程中浅染，其进行染色时0.1%固绿染液浅染的时间均可以是1-2分钟,或根据染色效果，适当缩短或延长染色时间。

    本发明采用叶的徒手横切制片和显微操作方法，简化了制片程序，缩短了制片时间，虽然切片的厚度要比切片机制作的切片厚一些，但观察时通过显微镜的精细调焦，却增加了观察到气孔窝侧壁叶表皮细胞形状与气孔器构成的概率。利用本发明这种制片方法，即使不能将气孔窝叶表皮上附着的所有叶肉细胞彻底除去，但通过浅染色和观察时对显微镜的精细调焦，就可较好地观察到气孔窝底部的叶表皮细胞形状及其气孔器构成。

本发明通过一种简单的制片方法，解决了夹竹桃气孔窝叶表皮的制片难题，获得了夹竹桃气孔窝的叶表皮制片。由于夹竹桃气孔窝形状不规则、底部不平整，表皮毛长而多，气孔器在气孔窝底部和侧壁的表皮上均存在，并且气孔器向气孔窝内凸出，这些因素使夹竹桃气孔窝的立体结构比较复杂。在对夹竹桃气孔窝的叶表皮细胞及气孔器进行观察时，要将气孔窝开口、气孔窝纵切面、气孔窝底部的叶表皮细胞观察结合起来，这样才能对夹竹桃气孔窝的叶表皮细胞形状及气孔器的结构产生一个立体而全面的认识。

附图说明：

图1：夹竹桃叶的下表皮，示气孔窝开口（荧光观察）；