[发明专利]一种检测次氯酸根的方法

说明书

技术领域

本发明涉及次氯酸根检测技术，具体属于一种快速、定量地检测次氯酸根的方法。

背景技术

NaOCl被广泛用于漂白剂和消毒剂，其浓度范围为10^-5～10^-2mol/L。它的质子化形式（次氯酸，HClO),是生物重要的活性氧物种(ROS)，在有机体和水处理中作为抗菌剂。然而，过量的HClO能造成组织损伤和疾病，如：肝缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化，肺损伤，类风湿和心血管疾病，神经元变性，关节炎和癌症。

目前已报道的检测次氯酸根的方法有：比色法（S.M.Chen,J.X.Lu,C.D.Sun,H.M.Ma.Analyst 135(2010)577–582）、发光法（J.Ballesta-Claver,M.C.Valencia-Miron,L.F.Capitán-Vallvey.Anal.Chim.Acta.522(2004)267–273）、电化学法（A.P.Soldatkin,D.V.Gorchkov，C.Martelet,N.Jaffrezic-Renault.Sens.Actuators,B.43(1997)99–104）、色谱法（A.Gallina,P.Pastore,F.Magno.Analyst 124(1999)1439–1442.），这些方法有的灵敏度低、有的耗时繁琐。也有一些基于次氯酸强的氧化特性的检测方法（Y.K.Yang,H.J.Cho,J.Lee,.Shin,J.Tae.Org.Lett.11(2009)859-861）。然而，这些方法由于试剂结构相对复杂而不容易合成。所以，发展一种检测过程简单、灵敏、成本低、适合实际使用的方法非常必要。

发明内容：

本发明的目的是为了克服现有技术次氯酸根检测中存在的问题，提供一种体系简单、操作方便、选择性高、灵敏度高的次氯酸根定量检测方法。

本发明提供的一种检测次氯酸根的方法，是在pH为7.0的HEPES缓冲溶液中，基于二吡啶甲醛荧光素酰腙（2-pyridylaldehyde fluorescein hydrazone，FHP），利用次氯酸根能将Cu⁺氧化为Cu²⁺，Cu²⁺与FHP形成配合物后，在紫外可见光谱上发生变化，实现次氯酸根的定量检测。

所述的FHP结构式为：

FHP的合成路线：

FHP的合成方法，步骤为：将荧光素酰肼、2-吡啶甲醛按摩尔比1∶1混合，完全溶解在甲醇中，用滴加1摩尔量当量的无水乙酸，回流2小时，用体积比为1∶1的甲醇和石油醚重结晶得到黄色的目标产物。

本发明提供的一种检测ClO^-的方法，包括如下步骤：

（1）、配制溶液：配制pH=7、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM的二吡啶甲醛荧光素酰腙（FHP）乙醇溶液,配制2mM的Cu⁺(加入抗坏血酸钠做稳定剂)乙腈溶液；

（2）、制定标准曲线：用蒸馏水配制2mM的ClO^-溶液；将2mL的HEPES缓冲溶液和40μL的FHP乙醇溶液以及80uL的Cu⁺乙腈溶液加到同一比色皿中；然后逐渐加入ClO^-溶液，在加入ClO^-溶液的体积依次为0、20、40、60、80、100uL时，在紫外可见分光光度仪上测定502nm对应的吸收强度A为0、0.13、0.25、0.37、0.47、0.58；最后以c=ClO^-浓度/10^-5mol/L为横坐标，吸收强度A为纵坐标绘制得到ClO^-浓度的标准曲线；线性回归方程为：A=0.01143+0.05771c；

（3）、检测：将2ml的HEPES缓冲溶液、40μL的FHP乙醇溶液和80μL的Cu⁺乙腈溶液，加入到另一个紫外比色皿中，从待测样品V_总uL中，用微量进样器取V₁uL加到此比色皿中，在紫外可见分光光度仪上检测在502nm处的吸收强度A；

（4）、计算：将测得的吸收强度A代入上述线性回归方程，即可求得比色皿中ClO^-的浓度c×10^-5mol/L，样品中ClO^-的浓度为c×10^-5×V_总/V₁。