[发明专利]一种辽东楤木高产皂苷愈伤组织的培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种愈伤组织的培养方法。

背景技术

辽东楤木[Aralia elates(Miq.)Seem]是一种食药兼用型经济植物，主要分布于中国东北地区。辽东楤木的食药用价值较高，其嫩芽含有丰富的营养成分，植株的叶片、根皮中均含有多种三萜皂苷，主要皂苷元为齐墩果酸，其具有增强体质、抗除疲劳、抗炎保肝、降血糖血脂、抗癌、抗病毒等作用，药用价值显著，可以作为生产中药制剂的原料。齐墩果酸类三萜皂苷的结构比较复杂，人工合成还比较困难，现在主要是从植物中提取。随着辽东楤木药用价值的显现，一些林区楤木资源被迅速开发利用，但同时也遭到严重破坏，目前现有的辽东楤木资源已难以满足市场的需求。

通过植物组织培养的方法可以大规模、快速地获得大量的具有本植物遗传特性的愈伤组织；可以为植物幼体提供适宜的、条件均一的微小气候环境，摆脱自然中温度、光照的变化及灾害性气候等不良因素对幼体的不利影响，对植物细胞生长极为有利；且一般次生代谢产物含量高的植物或器官诱导出的愈伤组织次生代谢物的含量也会较高。因此，利用组织培养大规模地生产愈伤组织为解决辽东楤木资源及三萜皂苷产物匮乏的难题提供了希望。

植物不同器官诱导及诱导产生的愈伤组织具有不同的环境适应性，在培养过程中需要适宜的激素、培养基、光照等条件才能够健康茁壮的生长。目前还没有关于辽东楤木组织培养方面的报道研究多在外植体诱导愈伤组织、植株再生方面，对愈伤组织诱导及生长的条件优化、愈伤组织中皂苷含量及产量方面的研究鲜有报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有辽东楤木愈伤组织难于培养，以及皂苷产量低的问题，而一种辽东楤木高产皂苷愈伤组织的培养方法。

本发明提供了一种辽东楤木愈伤组织的培养方法，培养的愈伤组织生长速度快、质地疏软、皂苷含量较高，培养方法简便易行。

本发明一种辽东楤木愈伤组织的培养方法是按以下步骤进行：一、采集辽东楤木的叶片，用水冲洗30~40min后，再用质量百分比浓度为70%的乙醇溶液浸泡消毒10s，然后用质量百分含量为0.1%HgCl₂浸泡消毒8min，最后用无菌水冲洗4~6次，再用无菌滤纸吸干叶片上的水分，将叶片切割成1×1cm²的正方形，接入到MS培养基中；二、将步骤一的MS培养基放置于黑暗条件下培养10~15d，培养温度为22℃~26℃，然后移至12h/d的光照条件下培养15~20d，培养温度为22℃~26℃，光照强度为2000~2500lx，长出愈伤组织；三、将愈伤组织转接到1/2MS培养基中，在12h/d光照条件下培养30d，培养温度为22℃~26℃，光照强度为2000~2500lx；四、按步骤三的处理方法继代培养愈伤组织3~6次，即完成辽东楤木高产皂苷愈伤组织的培养。

本发明培养方法操作简便，材料成本低，设备要求低，污染率极低；愈伤组织出愈率高，可达100%；培养的愈伤组织生长健康，呈黄绿色或绿色，富有光泽，质地疏软，生长速度快，每瓶鲜重为5.50～6.50g，干重为0.48～0.56g；愈伤组织中皂苷含量高，为0.95%～1.20%，皂苷产量为每瓶4.56～6.72mg。

附图说明

图1为将叶片接种到诱导培养基中的照片；

图2为叶片诱导生出愈伤组织的图片；

图3为愈伤组织的继代培养的图片；

图4为二次继代培养30d的愈伤组织的图片；

图5为继代培养的60d的愈伤组织的图片；

图6为继代培养90d的愈伤组织的图片。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。