[发明专利]一种贴壁培养的细胞的冷冻保存方法无效
| 申请号： | 201210152637.3 | 申请日： | 2012-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN102696575A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 谭秀文;赵红波;宋恩亮;刘桂芬;成海建;刘晓牧;万发春 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 济南诚智商标专利事务所有限公司 37105 | 代理人： | 韩百翠 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 培养 细胞 冷冻 保存 方法 | ||
1.一种贴壁培养的细胞的冷冻保存方法，其特征是，将培养瓶内细胞培养液吸净，根据培养瓶型号，重新加入新鲜的细胞培养液，然后加入2×冷冻液，轻轻晃动培养瓶，让细胞培养液与2×冷冻液混匀，渗透进入贴壁细胞质内，之后将培养瓶依次平放在冰箱4℃层30-60分钟，-20℃层30-40分钟，最后放在-80℃的超低温冰箱中保存；
所述2×冷冻液为：将14-20份二甲基亚砜、2-6份Supercool X-1000、20-40份胎牛血清溶解在35-45份DMEM/F12液中，之后分装到灭菌的1.5毫升离心管中，每管0.5-1.0毫升，放置4℃保存；上述份数均为体积份数；
所述冷冻前T25型培养瓶的2×冷冻液、新鲜细胞培养液添加量均为0.5ml；T75型培养瓶的2×冷冻液、新鲜细胞培养液添加量均为1.5ml。
2.采用权利要求1所述冷冻保存方法保存的细胞的解冻方法，其特征是，解冻时，直接将培养瓶从超低温冰箱中取出，在空气中停留3-4秒，然后快速放入37-40℃水浴锅中，轻轻晃动至冷冻液溶解，在超净台内加入细胞培养液，轻轻晃动培养瓶，让细胞培养液充分稀释冷冻液内二甲基亚砜，之后放入培养箱内培养。
3.如权利要求2所述的解冻方法，其特征是，所述解冻后T25型培养瓶的细胞培养液添加量为10ml，T75型培养瓶的细胞培养液添加量为30ml。
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