[发明专利]重组蛋白混合物介导的牛结核病诊断方法及其试剂

权利要求书

1.一种重组蛋白混合物介导的牛结核病诊断试剂，所述重组蛋白混合物由三种重组蛋白组成，所述三种重组蛋白分别具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列。

2.权利要求1所述的重组蛋白混合物介导的牛结核病诊断试剂，其中所述三种重组蛋白的混合比例为1~2：1~2：1~2。

3.权利要求2所述的重组蛋白混合物介导的牛结核病诊断试剂，其中所述三种重组蛋白的混合比例为1：1：1或2：2：1或1：1：2。

4.一种试剂盒，其中包括权利要求1至3任一项所述的诊断试剂和ELISA检测所需的包被缓冲液、洗涤缓冲液、酶标板和辣根过氧化物酶标记鼠抗牛IFN-γ单抗等试剂。

5.用于制备权利要求1至3任一项所述诊断试剂的引物，其中包括4对引物，其中核苷酸序列如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:11所示。

6.一种制备权利要求1至3任一项所述诊断试剂的方法，该方法包括：（a）PCR扩增获得重组蛋白编码基因，其中PCR扩增使用权利要求5所述的引物；（b）重组表达步骤（a）获得的编码基因得到所述重组蛋白；（c）将步骤（b）获得的重组蛋白混合得到所述诊断制剂。

7.权利要求6所述的制备方法，其中步骤（b）重组表达使用的宿主为大肠杆菌。

8.权利要求6或7所述的制备方法，其中步骤（c）中重组蛋白的混合比例为1~2：1~2：1~2。

9.一种重组蛋白混合物介导的牛结核病诊断方法，其中包括（a）用权利要求1至3任一项所述的诊断试剂对待检血液样品进行处理；（b）用ELISA方法测定处理后血液样品上层血浆中IFN-γ的释放水平。

10.一种重组蛋白混合物介导的牛结核病诊断方法，其中包括（a）剃毛后测量牛颈部上1/3处皮肤厚度；（b）向测量部位施用权利要求1至3任一项所述的诊断试剂；（b）72小时后，再测皮肤厚度，并计算该部位注射前后的皮厚差。