[发明专利]一种耐高温的华根霉脂肪酶突变体有效
| 申请号： | 201210145502.4 | 申请日： | 2010-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN102653742A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 喻晓蔚;徐岩;王睿 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/20 | 分类号： | C12N9/20;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 耐高温 华根霉 脂肪酶 突变体 | ||
1.一种耐高温的华根霉脂肪酶突变体，其特征在于由亲本华根霉（Rhizopus chinensis ）CCTCC NO：M 201021脂肪酶进行定向进化，通过易错PCR、DNA Shuffling和定点突变，获得脂肪酶突变体，亲本华根霉氨基酸序列SEQ ID NO: 1中在氨基酸取代位置发生突变，采用“原始氨基酸-位置-替换的氨基酸”来表示脂肪酶突变体中突变的氨基酸，所述脂肪酶突变体为：
脂肪酶突变体 ：突变体12-1；
氨基酸取代位置：Ala230Phe/Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/Lys161Arg；
华根霉脂肪酶氨基酸突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO: 2；
用于表达所述的脂肪酶突变体的表达载体为：pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα，pPICZ；
用于所述的表达载体转化的微生物宿主细胞为毕赤酵母。
2.根据权利要求1所述的脂肪酶突变体，其特征在于与亲本华根霉脂肪酶相比，所述脂肪酶突变体的热稳定性获得了提高，以在65℃下的半衰期t50来表示热稳定性的提高，所述脂肪酶突变体的半衰期以及提高的倍数如下：
脂肪酶突变体：突变体12-1；
氨基酸取代位置： Ala230Phe/Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/ Lys161Arg；
65℃ t50(min)： 755；65℃ t50(min) 提高倍数：45.76；
亲本华根霉脂肪酶在65℃下的半衰期t50为16.5 min。
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