[发明专利]检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒及其方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种检测试剂盒，特别是一种采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测人血清中和关节腔液中补体Clq浓度的试剂盒及其方法。

背景技术

补体Clq是补体系统Cl的第一组成成份，是一个巨分子量糖蛋白，一个Clq分子由18个多肽链成，化学组成为胶原性蛋白分子量：410KD。现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定补体Clq浓度，但是其步骤复杂，准确性不高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒及其方法，所述的这种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒及其方法要解决现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定补体Clq浓度过程复杂，准确性不高的技术问题。

本发明提供了一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒，包括两种试剂，I试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA₂和TX-100组成，在所述的I试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量浓度为28.6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量浓度为2.7g/L，所述的PEG6000的质量浓度为50g/L，所述的EDTA-NA₂的质量浓度为1g/L，所述的TX-100的体积浓度为0.2ml/L，II试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA₂、TX-100和补体Clq抗血清或者补体Clq单克隆抗体组成，在所述的II试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量浓度为28.6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量浓度为2.7g/L，所述的PEG6000的质量浓度为50g/L，所述的EDTA-NA₂的质量浓度为1g/L，所述的TX-100的体积浓度为0.2ml/L，所述的补体Clq抗血清或者补体Clq单克隆抗体的体积浓度为300ml/L。

进一步的，所述的补体Clq抗血清为羊抗人补体Clq抗血清、或鼠抗人补体Clq抗血清，所述的补体Clq单克隆抗体为鼠抗人补体Clq单克隆抗体。

进一步的，所述的TX-100的纯度为100％。

进一步的，所述的兔抗人补体Clq抗血清的效价为1∶64。

本发明还提供了一种检测人血清中补体Clq浓度的方法，采用上述的试剂盒，包括一个将样本采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将样本采用生化分析仪测定的步骤中，将样品加入I试剂R1后，37℃孵育5min，读测第1点样本A1，加入II试剂R2，37℃孵育5min，读测第2点样本A2，样本A＝样本A2-样本A1；还包括一个将校准品采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将校准采用生化分析仪测定的步骤中，将校准加入I试剂R1后，37℃孵育5min，读测第1点校准A1，加入II试剂R2，37℃孵育5min，读测第2点校准A2，校准A＝校准A2-校准A1；

上述测定的参数为：温度37℃，主波长340nm、546nm、600nm，副波长700nm，样本或校准品3-4μl，R₁：240μl，R₂：60μl，反应时间为10分钟。

本发明的羊抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq单克隆抗体可以在市场购买，也可以通过常规的免疫方法制备。

本发明的试剂盒和方法是采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的测定原理，即利用补体Clq抗原和兔抗人补体Clq抗血清、羊抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq单克隆抗体相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，其浊度高低，即透光度减少、吸光度增加反映人血清样本中补体Clq的浓度，补体Clq的浓度可由校准品所作的剂量反应曲线算出。

采用本发明的试剂盒和方法测得的Clq的浓度可以作为科研和教学使用。

本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明的试剂盒和方法用于测定补体Clq浓度的过程简单方便，准确性高。

附图说明

图1是由校准品所作的补体Clq浓度和吸光度的剂量反应曲线图。

具体实施方式

实施例1  免疫透射比浊法

当一束入射光照射液相中的IC时，一部分光被IC粒子吸收，一部分光透过，还有一部分光被IC粒子散射。利用比浊仪在光源的光路方向上测量透射光强度与入射光强度的比值或吸光值，来判断待测抗原的量，此法称为透射比浊法。

1.1适用仪器

半自动、全自动生化分析仪。

1.2分析方法

免疫透射比浊法。