[发明专利]湘蕾金银花叶片离体培养与植株再生和扩繁方法及培养基

说明书

技术领域

本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种湘蕾金银花叶片离体培养与植株再生和扩繁方法及培养基。

背景技术

湘蕾金银花的原植物为灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand Mazz)，是1997年从灰毡毛忍冬自然变异株选育出来的品种。

生产中，湘蕾金银花的主要繁殖方法是扦插和嫁接，但扦插繁殖生根时间较长(1-3个月)，生根率不高(只有30％～40％)，以金银花为砧木嫁接的“湘蕾金银花”，树冠扩大后，容易出现后期不亲和与早衰，大部分发黄，有的枯萎或者死亡，且两种方法的繁殖系数和繁殖速度都有限，而用现有的灰毡毛忍冬离体组培技术增殖系数低，得到的植株生根少，需时长，成本高，品质低，移栽成活率低，难以满足市场上对其优质种苗的需求。

另外，现有的灰毡毛忍冬离体组培技术采用的外植体主要是茎尖、带腋芽茎段，增殖方式是直接从外植体上产生丛生芽的器官型增殖方式；诱导叶片愈伤组织及其再分化的技术相对滞后，影响了现代生物技在其遗传改良和新品种的选育中的应用。

发明内容

本发明旨在克服现有湘蕾金银花离体培养及扩繁技术中存在的增殖系数低，得到的植株生根少，需时长，成本高，品质低，移栽成活率低，难以满足市场上对其优质种苗的需求的问题，提供一种湘蕾金银花叶片离体培养与植株再生和扩繁方法及培养基。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：所述湘蕾金银花叶片离体培养与植株再生和扩繁方法，包括如下步骤：

(1)叶片愈伤组织的诱导：选择湘蕾金银花健康植株上的幼叶或成年叶，用75％酒精浸泡30秒钟后，然后用1～2％的NaClO消毒6～10min，再用无菌水冲洗2～3遍，在超净工作台上将叶片剪成约1cm²的小块接种到愈伤组织诱导培养基中，培养30～40天，得生长状态很好的愈伤组织，其中，诱导培养基成分为：B₅+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+3％蔗糖；

(2)愈伤组织的分化：将诱导的愈伤组织转移到分化培养基上，培养1～2个月，得到较多的丛生芽，其中，分化培养基成分为：B₅+6-BA 1.5mg/L+NAA0.1mg/L+3％蔗糖；

(3)壮苗培养：将密集的丛生芽分离，转移到无激素的1/2MS壮苗培养基上培养1～2周；

(4)生根培养：将经步骤(3)培养出的无根壮苗转移到生根培养基上进行生根培养，约20-25天待根长3-5cm时即可出瓶炼苗移栽，其中，生根培养基成分为：1/4MS+NAA0.2mg/L+IBA0.4mg/L+1.5％蔗糖。

本发明的有益效果体现在：

利用本发明的方法对湘蕾金银花进行离体培养与再生扩繁，增殖系数高，愈伤组织的分化率达70％～80％；无根苗生根培养20-25天时生根11-13条，需时短，苗生长健壮，且所用激素、糖，MS母液的浓度也比较低，大大节省了成本。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

叶片愈伤组织的诱导：

选择湘蕾金银花健康植株上的幼叶或成年叶，用75％酒精浸泡30秒钟后，然后用2％的NaClO消毒6min，再用无菌水冲洗3遍，在超净工作台上将叶片剪成1cm²的小块接种到培养基成分为B₅+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+3％蔗糖的愈伤组织诱导培养基中培养30～40天；

愈伤组织的分化：

将诱导的愈伤组织转移到培养基成分为B₅+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L+3％蔗糖的分化培养基上培养1～2个月，得丛生芽；

壮苗培养：

将密集的丛生芽分离，转移到无激素的1/2MS壮苗培养基上培养1～2周；

生根培养：

将无根壮苗转移到培养基成分为1/4MS+NAA0.2mg/L+IBA0.4mg/L+1.5％蔗糖的生根培养基上进行生根培养20-25天，待根长3～5cm时出瓶炼苗移栽。

实施例2本发明湘蕾金银花叶片离体培养与植株再生和扩繁方法与现有技术的效果对比实验

在其他条件一致的前提下，将本发明的方法与现有技术中的离体培养方法进行对比实验，实验参数及结果如表1所示：

表1

由表1可以看出，与现有的湘蕾金银花离体组培技术相比，利用本发明的方法和培养基对湘蕾金银花进行离体培养与再生扩繁，增殖系数高，愈伤组织的分化率达70％～80％；无根苗生根培养20-25天时生根11-13条，需时短，苗生长健壮，且所用激素、糖，MS母液的浓度也比较低，大大节省了成本。