[发明专利]一种快速定量检测土壤中有机磷农药残留的方法

权利要求书

1.一种快速定量检测土壤中有机磷农药残留的方法，其特征在于，包括步骤：

A、土壤样品的处理，包括：(1)有机磷农药污染土壤样品的处理：将含有机磷农药的风干土壤样品充分研磨后，过100目筛，取一支干净的试管，准确称取0.50g土样，加入2.5mL pH8.0磷酸缓冲液在混合仪上充分混匀3-5min，为待检土壤样品悬液；(2)空白土壤样品的处理：将不含农药的土样风干后，充分研磨后，过100目筛，准确称取0.50g空白土样，加入2.5mL pH8.0磷酸缓冲液在混合仪上充分混匀3-5min，为待检空白土样悬液；

B、空白对照土样的测试：将上述待检空白土样悬液，加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，然后6000r/min离心5min，取上清，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A₀，加入0.1mL底物摇匀，然后检测、记录反应后的吸光度值，并计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量ΔA₀；

C、标准曲线的制作：另取5支干净的试管，按步骤A中空白土壤样品处理的方法制备待检空白土样悬液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL酶液和0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，然后6000r/min离心5min，取上清，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A₁，加入0.1mL底物后充分摇匀，然后检测、记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量ΔA₁；然后将本步骤C中的前述过程重复做三次，并求得变化量ΔA₁的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，然后分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log₁₀，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log₁₀为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；

D、有机磷农药污染土样的测定：取一支干净的试管，按步骤A中污染土壤样品处理的方法制备待检土壤样品悬液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，然后6000r/min离心5min，取上清，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A₂，加入0.1mL底物后充分摇匀，然后检测、记录反应后的吸光度值，并计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量ΔA₂；然后将本步骤D中的前述过程重复做三次，并求得变化量ΔA₂的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出其农药残留。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤B重复同时做三次重复，并且ΔA₀应大于0.3。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述0.02M pH8.0磷酸缓冲液的配制方法为：分别称取0.6785g十二水磷酸氢二钠与0.0165g二水磷酸二氢钠，用蒸馏水溶解，并定容至1000mL。

4.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述酶液为丁酰胆碱酯酶溶液。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述显色剂的配制方法为：

分别称取80mg二硫代二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氢钠，用缓冲溶液溶解，并定容至10mL后4℃冰箱保存。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述底物为碘化硫代丁酸胆碱溶液，其配制方法为：称取24mg碘化硫代丁酸胆碱，加入3.0mL蒸馏水，充分摇匀溶解后置4℃冰箱保存。

7.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述抑制率(％)＝[(ΔA-ΔA₀)/ΔA₀]×100％，其中：公式中ΔA₀表示对照溶液反应前后的吸光度的变化量；ΔA表示样品溶液反应前后的吸光度的变化量。