[发明专利]蜡杨梅酸A的高效分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于天然物质的提取技术领域，涉及蜡杨梅酸A的高效分离纯化方法。

背景技术

蜡杨梅酸A（Myriceric acid A）分子式为C₃₉H₅₂O₇，分子量为632.84。分子结构式为：

。

蜡杨梅酸A为三萜类化合物，无色片状结晶（甲醇-水8:2），mp.211-213℃。是从杨梅科植物蜡杨梅Myrica cerifera L.小枝中分离得到，药理研究表明，蜡杨梅酸A具有内皮素受体（ETA）拮抗活性，在大鼠主动脉平滑肌细胞（A7r5）中，抑制内皮素与A7r5的结合，IC₅₀为0.04μg/mL；抑制内皮素诱导的Ca²⁺移动的IC₅₀为0.0075μg/mL。

现有技术中，尚未检索到大量提取制备蜡杨梅酸A的工艺报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种蜡杨梅酸A的高效分离纯化方法，本发明的目的通过以下技术方案来实现：

蜡杨梅酸A的高效分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

A.取蜡杨梅药材粉碎，用5-10倍量的丙酮溶液浸渍，渗漉提取，至渗漉液颜色变浅，收集渗漉液；

B.将渗漉液加硅藻土脱色，过滤，减压回收丙酮，得浓缩液；

C.将浓缩液注入大孔吸附树脂柱层析，吸附、洗脱后减压浓缩干燥得粗提取物；

D.将粗提取物加入去离子水，微沸状态下提取，过滤，所得沉淀物加乙醇溶解，碱调pH至10-11，过滤，滤液加稀盐酸调pH至3-4，静置结晶；

E.将结晶用甲醇溶解重结晶得到蜡杨梅酸A产品。

步骤B中所述硅藻土加入量为总液体量的3-5%。

步骤C中所述大孔吸附树脂为XAD-1、NKA、XSD-3、SP825中的一种。

步骤C中所述大孔吸附树脂柱层析洗脱剂为50%-80%乙醇溶液。

本发明的优点在于：本发明工艺简单、成本低、适合工业化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取蜡杨梅药材粉碎，用5倍量的丙酮浸泡2小时，然后装入渗漉桶中，继续加入丙酮溶液以5ml/min流速开始渗漉提取，至渗漉液颜色变浅，收集渗漉液，将渗漉液加5%的硅藻土搅拌脱色，过滤，减压回收丙酮，将浓缩液注入SP825大孔吸附树脂柱层析，吸附，50%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥得粗提取物；将粗提取物加入去离子水，微沸状态下提取1小时，过滤，所得沉淀物加乙醇溶解，氨水调pH至10.5后过滤，所得滤液加稀盐酸调pH至3.3，静置结晶，将结晶用甲醇溶解重结晶得到蜡杨梅酸A产品，HPLC分析其纯度为95.7%。

实施例2：

取蜡杨梅药材粉碎，用8倍量的丙酮浸泡2.5小时，然后装入渗漉桶中，继续加入丙酮溶液以4ml/min流速开始渗漉提取，至渗漉液颜色变浅，收集渗漉液，将渗漉液加3%的硅藻土搅拌脱色，过滤，减压回收丙酮，将浓缩液注入XAD-1大孔吸附树脂柱层析，吸附，65%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥得粗提取物；将粗提取物加入去离子水，微沸状态下提取1.5小时，过滤，所得沉淀物加乙醇溶解，氨水调pH至10.2后过滤，所得滤液加稀盐酸调pH至3.5，静置结晶，将结晶用甲醇溶解重结晶得到蜡杨梅酸A产品，HPLC分析其纯度为96.4%。

实施例3：

取蜡杨梅药材粉碎，用6倍量的丙酮浸泡1.5小时，然后装入渗漉桶中，继续加入丙酮溶液以3ml/min流速开始渗漉提取，至渗漉液颜色变浅，收集渗漉液，将渗漉液加5%的硅藻土搅拌脱色，过滤，减压回收丙酮，将浓缩液注入NKA大孔吸附树脂柱层析，吸附，80%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥得粗提取物；将粗提取物加入去离子水，微沸状态下提取1.5小时，过滤，所得沉淀物加乙醇溶解，氨水调pH至11后过滤，所得滤液加稀盐酸调pH至3.4，静置结晶，将结晶用甲醇溶解重结晶得到蜡杨梅酸A产品，HPLC分析其纯度为95.3%。

实施例4：

取蜡杨梅药材粉碎，用10倍量的丙酮浸泡1小时，然后装入渗漉桶中，继续加入丙酮溶液以5ml/min流速开始渗漉提取，至渗漉液颜色变浅，收集渗漉液，将渗漉液加4%的硅藻土搅拌脱色，过滤，减压回收丙酮，将浓缩液注入XSD-3大孔吸附树脂柱层析，吸附，70%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥得粗提取物；将粗提取物加入去离子水，微沸状态下提取1小时，过滤，所得沉淀物加乙醇溶解，氨水调pH至10.2后过滤，所得滤液加稀盐酸调pH至3.8，静置结晶，将结晶用甲醇溶解重结晶得到蜡杨梅酸A产品，HPLC分析其纯度为96.1%。