[发明专利]一种在哺乳动物细胞中生产DHA的方法

权利要求书

1.一种促进哺乳动物细胞生产DHA的试剂盒，包括线虫(Caenorhabditis briggssae)ω-3脂肪酸去饱和酶基因、哺乳动物脂肪酸延长酶基因和哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述线虫(Caenorhabditis briggssae)的ω-3脂肪酸去饱和酶基因为sfat1基因，所述sfat1基因的核苷酸序列为序列表中序列1；所述哺乳动物脂肪酸延长酶基因为小鼠脂肪酸延长酶基因，优选为小鼠elovl2基因，所述小鼠elovl2基因的核苷酸序列为序列表中序列2；所述哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因为小鼠脂肪酸去饱和酶基因，优选为小鼠Δ6desaturase基因，所述小鼠Δ6desaturase基因的核苷酸序列为序列表中序列3。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括真核表达载体，所述真核表达载体为pCAGGS；所述试剂盒还包括抗性筛选标记基因；所述抗性筛选标记基因包括zeocin抗性基因、neomycin抗性基因或hygro抗性基因；所述zeocin抗性基因的核苷酸序列是自序列表中序列4的5′端第564-938位核苷酸，优选为自序列表中序列4的5′端第52-941位核苷酸；neomycin抗性基因的核苷酸序列是自序列表中序列5的5′端第567-1370位核苷酸，优选序列表中序列5；hygro抗性基因的核苷酸序列是自序列表中序列6的5′端第178-1203位核苷酸序列，优选自序列表中序列6的5′端第114-1206位核苷酸。

4.一种制备DHA生产能力提高的哺乳动物转基因细胞系的方法，是将线虫(Caenorhabditis briggssae)ω-3脂肪酸去饱和酶基因、哺乳动物脂肪酸延长酶基因、哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因导入离体的哺乳动物细胞中，筛选获得稳定整合及表达ω-3脂肪酸去饱和酶基因、哺乳动物脂肪酸延长酶基因、哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因的哺乳动物转基因细胞系，即为DHA生产能力提高的哺乳动物转基因细胞系。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述线虫(Caenorhabditis briggssae)的ω-3脂肪酸去饱和酶基因为sfat1基因，所述sfat1基因的核苷酸序列为序列表中序列1；所述哺乳动物脂肪酸延长酶基因为鼠脂肪酸延长酶基因，优选为小鼠elovl2基因，所述小鼠elovl2基因的核苷酸序列为序列表中序列2；所述哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因为鼠脂肪酸去饱和酶基因，优选为小鼠Δ6desaturase基因，所述小鼠Δ6desaturase基因的核苷酸序列为序列表中序列3；所述哺乳动物细胞为鼠细胞，优选为中国仓鼠卵巢细胞K1。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述ω-3脂肪酸去饱和酶基因、哺乳动物脂肪酸延长酶基因和哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因先分别以真核表达载体为出发载体，分别构建得到表达ω-3脂肪酸去饱和酶基因的重组表达载体、表达哺乳动物脂肪酸延长酶基因的重组表达载体和表达哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因的重组表达载体，然后三个重组表达载体共转染哺乳动物细胞系，筛选得到所述哺乳动物转基因细胞系；所述真核表达载体为pCAGGS。

7.根据权利要求6中任意一项所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体是以真核表达载体为出发载体，将所述真核表达载体先插入抗性筛选标记基因，构建具有抗性筛选标记的重组表达载体，然后插入所述ω-3脂肪酸去饱和酶基因、哺乳动物脂肪酸延长酶基因或哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因，获得表达ω-3脂肪酸去饱和酶基因的重组表达载体、表达哺乳动物脂肪酸延长酶基因的重组表达载体或表达哺乳动物脂肪酸去饱和酶基因的重组表达载体；所述抗性筛选标记基因为zeocin抗性基因、neomycin抗性基因或hygro抗性基因；所述zeocin抗性基因的核苷酸序列是自序列表中序列4的5′端第564-938位核苷酸，优选为自序列表中序列4的5′端第52-941位核苷酸；neomycin抗性基因的核苷酸序列是自序列表中序列5的5′端第567-1370位核苷酸，优选序列表中序列5；hygro抗性基因的核苷酸序列是自序列表中序列6的5′端第178-1203位核苷酸序列，优选自序列表中序列6的5′端第114-1206位核苷酸。

8.权利要求4-8中任意一项所述方法制备的哺乳动物转基因细胞系。