[发明专利]来源于血清的水溶性胆固醇冻干品的制备方法

说明书

[技术领域]

本发明涉及一种胆固醇的冻干品，具体的说是一种应用在生物、医学检验研究的来源于血清的水溶性胆固醇冻干品的制备方法。

[背景技术]

胆固醇，别名胆甾醇，化学式为C₂₇H₄₆O，是一种类固醇及甾醇。胆固醇是水溶性很差的有机化合物，纯品胆固醇在水中的溶解度大约只有0.095mg/L(30℃)，因此在这样低的溶解性下，用作溶液配制或校准品/质控品制备将会很难添加。由于血清中有含有一定浓度的水溶性胆固醇，这些水溶性胆固醇或与某些化合物结合，或与脂蛋白结合，从而具有较强的水溶性，鉴于此，目前有些企业采取高浓度血清当作配制用，还有一些通过浓缩血清得到高浓度的胆固醇浓缩液，但是这些做法的缺陷是：一则难以获得纯度较高的产品，其血清基质含量很高，从而影响了产品的品质；再次，由于是液体产品，其稳定性较差。

对于干燥热敏性制品和需要保持生物活性的物质，冻干是一种有效的方法。该方法有效地防止了制品理化及生物特性的改变，能有效保护了许多热敏性药物生物制品有效成份的稳定性。到目前为止有很多药品、生物制品等采用冻干方法进行制备。

[发明内容]

本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种来源于血清的水溶性胆固醇冻干品的制备方法。

为了实现上述目的，本发明设计了一种来源于血清的水溶性胆固醇冻干品的制备方法，采用如下步骤：

A、用1mol/L的氢氧化钠将其pH值调至6.9，取150ml无水乙醇逐滴加入不断搅拌的血清中，室温搅拌2h后，1000g离心10min，收集沉淀物；

B、称取0.3g葡聚糖和6.5g氯化钙，溶于500ml去离子水中，用这一溶液溶解步骤A中收集到的沉淀，室温搅拌2h后，1000g离心10min，再次收集沉淀物；

C、将步骤B中收集到的沉淀物重新溶解，之后冻干，即得富含胆固醇的冻干品。

所述步骤A中，血清的含量为1L，pH为5-9。

所述步骤B中，氯化钙的浓度为25mmol/L。

所述步骤B中，葡聚糖的浓度为2.6mmol/L。

本发明同现有技术相比，胆固醇冻干后用去离子水复溶，外观呈澄明，胆固醇纯度高，该冻干品能长期稳定贮存，方法操作简便、重复性好，回收率高。而且其来源于血清，因此可以广泛应用于生物、医学检验等领域。

[具体实施方式]

本发明提供了一种血清来源的富含水溶性胆固醇的冻干品。本发明提供的冻干品稳定性好，复溶后液体澄明，不含异物或不溶物，水溶性的胆固醇既不会对常规项目的检测有明显的干扰，也不会对其他组分的稳定性有影响。

下面通过实施例对本发明作进一步描述。

本发明为一种来源于血清的水溶性胆固醇冻干品的制备方法，采用如下步骤：(A)以1L血清为例，用1mol/L的氢氧化钠将其pH值调至6.9，取150ml无水乙醇逐滴加入不断搅拌的血清中，室温搅拌2h后，1000g离心10min，收集沉淀物；

(B)称取0.3g葡聚糖和6.5g氯化钙，溶于500ml去离子水中，用这一溶液溶解步骤A中收集到的沉淀，室温搅拌2h后，1000g离心10min，再次收集沉淀物；

(C)将步骤B中收集到的沉淀物重新溶解，之后冻干，即得富含胆固醇的冻干品。

实验一、复溶后胆固醇的外观检验

将按上述实施例制备的冻干品分别顺序编号后，采用随机数表决定抽取样品的号码，随机抽取5支做检验。加入去离子水复溶，冻干品快速溶解，10-15min溶解完全，液体澄明，不含异物或不溶物。

实验二、胆固醇浓度的测定

胆固醇酶法测定简便，具有足够的灵敏度，精密度良好，故选用酶法测定胆固醇浓度。选用胆固醇试剂盒，采用自动生化分析仪对5支复溶的胆固醇冻干品进行测定，具体参数参见下表。

通过上表可知，胆固醇冻干品的含量非常高。

实验三、胆固醇冻干品稳定性监测

将胆固醇冻干品放置在2-8℃冰箱进行长期稳定性实验，保存不同的时间后用胆固醇试剂盒检测胆固醇的浓度，计算相对偏差，具体数据参见下表。

上述数据表明，冻干品稳定性良好。