[发明专利]香草醛-硫酸测定甘草提取多糖后浸膏中甘草酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甘草酸定量技术领域，更具体地，是一种香草醛-硫酸测定甘草提取多糖后浸膏中甘草酸含量的方法；用香草醛-硫酸法检测甘草提取多糖后浸膏中提取分离甘草酸后甘草酸含量变化趋势的方法。

背景技术

甘草为豆科(Leguminosae)甘草属(Glycyrrhiza)植物，主要有效成分为三萜化合物、黄酮类和多糖化合物等。甘草酸是甘草的根和根茎中所含的一种五环三萜皂苷，具有抗炎、抗氧、抑菌等作用，但过量服用甘草酸可能引起钠潴留和高血压。

甘草提取物的利用大部分是关于甘草酸，由于甘草中含有多类有效成分，只提取甘草酸后所剩残余物如果直接丢弃，会造成资源的浪费。为了节约资源，使中药材资源得到充分的利用，需要对提取完甘草酸后的甘草浸膏开展利用研究。中国专利(CN1359905)公开了一种从甘草中系统分离、提取甘草黄酮、甘草酸、甘草多糖生产方法。目前对提取完甘草酸后甘草渣的利用研究较多，主要是从中提取糖类、黄酮类成分，或者利用其作为原料制备其它物质。中国专利(CN1752081)公开了一种从甘草渣中提取甘草黄酮的方法。中国专(CN101519408)公开了一种从甘草渣中生产光甘草定的方法。中国专利(CN102154908A)公开了一种利用甘草渣制备浆粕的方法。中国专利(CN1322483)公开了一种利用甘草渣制备粗饲料的技术。中国专利(CN1292990)公开了一种利用甘草渣制备食用菌培养料的方法。中国专利(CN102151296A)公开了一种从甘草渣中提取降血糖活性成分的方法。综上所述，大多研究为对提取完甘草酸后甘草渣的利用，但是目前尚未见到从提取完甘草多糖后的甘草浸膏中提取甘草酸的研究报道。甘草渣一般为药材提取完后的药材残渣，由于甘草中有效成分为三萜化合物、黄酮类和多糖类，一些药厂提取完糖类后得到甘草浸膏，甘草浸膏未提取其它物质，所以对甘草浸膏的再利用问题，是药厂等比较关心的问题。

从提取完甘草多糖后的甘草浸膏中提取分离甘草酸，由于涉及的甘草浸膏不含糖类的特性以及所用的分离方法为吸附树脂流化床，重点考察的是含量的变化趋势，所以亟需找到一种简便、准确、稳定的测定甘草酸含量的方法。目前，甘草酸含量测定方法主要有：重量法、比色法、紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法及毛细管电泳法等。高效液相色谱和毛细管电泳法精确度高，但成本高，一般更适用于甘草酸含量较少时具体含量的测定，如一些制剂中甘草酸含量的测定。比色法在测定皂苷类成分含量方面仍比较常见，鱼红闪、张恩淑利用香草醛-硫酸法测定甘草酸含量时，均用乙醇溶液溶解显色剂进行直接测定，但经过预实验发现乙醇对吸光度的测定有很大干扰，且刘芃岩等研究也发现甲醇、乙醇等溶剂对该法显色有很大干扰。张中伟发现香草醛-高氯酸法作为三萜皂苷常用的显色剂，较香草醛-硫酸法精密度高，受糖类干扰小，但该法需要用到冰醋酸和高氯酸两种溶剂。

发明内容

本发明的目的在于根据待测的甘草浸膏的特性，对原有的香草醛硫酸显色条件进行改进，并对显色前溶液进行预处理，为药厂对甘草提取多糖后的浸膏的利用提供一种适合检测该浸膏进行提取和粗分离甘草酸后甘草酸含量变化趋势的简便、准确、稳定的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

香草醛-硫酸测定甘草提取多糖后浸膏中甘草酸含量的方法，该方法的步骤如下：

(1)甘草酸标准溶液和样品待测溶液的配制

用无水乙醇加去离子水配制成10～30％的乙醇溶液。称取0.0250g甘草酸溶于10～30％的乙醇中，配制成1.0mg·mL^-1的甘草酸标准溶液。称取0.0250g干燥后的甘草浸膏溶于10～30％的乙醇中，同样配制成1.0mg·mL^-1的样品待测溶液

(2)标准溶液和样品待测溶液的预处理

(3)吸光度的测定

向处理后的溶液，加入0.25mL 5.0～7.0mg·mL^-1香草醛水溶液和1.75～2.25mL 70～80％(v/v)硫酸，放入70～80℃的水浴中加热20～30min，以0.25mL蒸馏水代替试样液为空白对照，在波长530～540nm，以1cm石英比色皿，用紫外可见分光光度计进行吸光度测定。

步骤(1)中所述，其特征在于所用样品为甘草提取多糖后浸膏，其不含有蛋白质、淀粉等糖类物质。

步骤(2)中所述，其特征在于甘草酸标准品溶液和甘草浸膏样品溶液在进行显色前必须进行预处理，具体步骤为：取待测液0.25mL，置于78～82℃水浴中，加热1～1.5h，将溶液中所含乙醇挥发。