[发明专利]一种结直肠癌的免疫组织化学染色检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体涉及一种结直肠癌的免疫组织化学染色检测试剂盒，同时还涉及一种结直肠癌的免疫组织化学染色检测试剂盒的用途。

背景技术

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，占胃肠道肿瘤的第3位。我国的发病率与死亡率，随着人民生活水平的提高，饮食结构的改变，呈逐年上升的趋势。结直肠癌已经成为威胁人类生命和健康不容忽视的疾病。结直肠癌起病隐匿，早期症状不明显，许多患者在确诊时已经处于晚期。大约25％的患者初次就诊时就已经发生转移，另外，40％-50％新诊断患者将继续发展出现转移。仅仅少于5％的患者能存活5年以上。因此，深入对结直肠癌的基础研究和提高结直肠癌的诊断率，对提高结直肠患者的生存率、降低其病死率具有相当重要的临床意义。

目前用于结直肠癌的诊断的方法包括大便潜血试验、内窥镜检查、影像学检察、分子生物学检查以及病理组织学检查。目前在结直肠癌诊断技术中，不同的检查手段是从不同侧面不同程度反映了区别于正常组织的肿瘤形态。单一的检查手段并不能明确病情，需要结合实际情况，选择多种检查手段才能做出判断。

其中病理诊断也是结直肠癌诊断中最可靠的诊断，是明确诊断以拟定治疗方案所必需的依据。常规的病理形态学检查包括脱落细胞学检查和活体组织检查。由于结直肠中脱落细胞常有不同程度的变性，阴性结果并不能否定肿瘤的存在，临床上结直肠癌脱落细胞学检查应用范围非常有限，主要依靠组织病理学检查明确诊断。

免疫组化是最近10多年来迅速发展起来的一门新兴技术。它已被广泛运用肿瘤研究和诊断，其原理是利用抗原与抗体的特异性结合反应来检测组织中的未知抗原或者抗体，主要是肿瘤相关抗原(肿瘤分化抗原和肿瘤胚胎抗原)，借以判断肿瘤的来源和分化程度，协助肿瘤的病理诊断和鉴别诊断。目前常用的染色方法有过氧化物酶-抗过氧化物酶法，即PAP法(peroxidaseantiperoxidase technique)和卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法，即ABC法(avidin-biotin-peroxidase complex technique)。利用免疫组织化学方法已经可以对许多常规方法难以判断其来源的肿瘤加以鉴别。例如检测细胞骨架的中间丝(intermediate filament)，其直径平均为10nm，介于微管和微丝之间。中间丝有五类：即神经原纤维、胶质原纤维酸性蛋白、结蛋白(desmin)、波形蛋白(vimentin)和角蛋白(keratin)。它们各有生物化学和免疫学特性，并分别存在于不同类型的细胞中，故具有相对的特异性，可用来协助诊断相应的神经细胞、神经胶质细胞、横纹肌和平滑肌、间叶组织和上皮细胞来源的肿瘤。目前能用于肿瘤辅助诊断和鉴别诊断的抗体已不胜枚举。此应用基于本发明人严教授的实验室研究结果和通过用本抗体对一定量的结直肠癌患者的癌组织标本进行免疫组织化学染色，发现其特异性和差异性表达的研究结果，表明可将其做为特异性诊断指标。参考文献列举：Targeting of antigens to B cells augments antigen-specific T-cell MUC1 responses and breaks immune tolerance to tumor-associated antigen，Chuanlin Ding，Li Wang，Jose Marroquin and Jun Yan，临床研究结果参考本专利的染色实验结果。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种结直肠癌的免疫组织化学染色检测试剂盒，该试剂盒不仅可以区分癌变组织和正常组织，还可以区分癌变组织中癌变的细胞和正常的细胞。本试剂盒将MUC1这一在结直肠癌患者的癌变组织中特异性高表达的细胞因子作为用于检测的参考指标。MUC1在癌变细胞上皮中呈阳性表达染色，而在正常结肠组织上皮细胞中呈阴性表达。MUC1蛋白阳性产物主要定位于细胞浆和细胞膜，表现为胞浆内和细胞表面有棕黄色颗粒，本试剂盒检测具有高灵敏性，高特异性和高准确性的特点，。

本发明的另一个目的是在于提供了一种用于结直肠癌免疫组织化学染色检测的试剂盒，该试剂盒能有效地区分结直肠癌变的上皮细胞和正常细胞，为临床的诊断和治疗提供参考依据。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种结直肠癌的免疫组织化学染色检测试剂盒，该试剂盒由以下物质组成：

a)小鼠来源的抗人MUC1单克隆抗体；

b)生物素标记的的羊抗小鼠IgG；

c)亲和素标记的HRP；

d)正常山羊血清封闭液；