[发明专利]VEGF拮抗剂制剂

说明书

本分案申请是基于申请号为200680008569.6，申请日为2006年03月22日，发明名称为“VEGF拮抗剂制剂”的中国专利申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及含有能够抑制血管内皮生长因子(VEGF)的物质的药物制剂，并涉及制备和使用该制剂的方法。本发明包括具有提高了的稳定性的药物制剂。

相关技术综述

血管内皮生长因子(VEGF)表达在人癌症中几乎普遍存在，与其作为肿瘤新血管生成的关键介体的作用相一致。VEGF功能通过与分子或其VEGFR-2受体结合的阻断抑制了多个不同异种移植物模型中植入的肿瘤细胞的生长(参见，例如，Gerber等人(2000)Cancer Res.60：6253-6258)。已经描述了可溶性VEGF特异性融合蛋白拮抗剂，被称为“VEGF捕集物(trap)”(Kim等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：11399-404；Holash等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：11393-8)。

冻干(在受控条件下冷冻干燥)通常用于蛋白质的长期贮藏。冻干的蛋白质在冻干状态下基本上能抵抗降解、聚集、氧化和其他退化过程(参见，例如，U.S.6,436,897)。

发明简述

在此提供了VEGF特异性融合蛋白拮抗剂的稳定制剂。本发明的药物学上可接受制剂包括VEGF“捕集物”拮抗剂和药物学上可接受的载体。具体实施方案中，提供了液体和冷冻干燥或冻干制剂。

第一个方面中，本发明的特征在于VEGF特异性融合蛋白拮抗剂的稳定液体制剂，包括含有基本上由第一个VEGF受体的免疫球蛋白样(Ig)结构域2和第二个VEGF受体的Ig结构域3构成的受体成分和多聚化成分的融合蛋白、一种或多种缓冲剂和一种或多种热稳定剂。VEGF特异性融合蛋白拮抗剂的具体实施方案中，第一个VEGF受体是Flt1而第二个VEGF受体是Flk1或Flt4。更具体的实施方案中，融合蛋白具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨基酸序列。一个实施方案中，缓冲剂是磷酸盐缓冲剂和/或柠檬酸盐。更优选，缓冲剂是磷酸盐和柠檬酸盐。一个实施方案中，热稳定剂是NaCl和/或蔗糖。更优选，热稳定剂是NaCl和蔗糖两者。

具体实施方案中，VEGF特异性融合蛋白拮抗剂的稳定液体制剂包括1-10mM磷酸盐缓冲剂、1-10mM柠檬酸盐、25-150mM NaCl、5-30％蔗糖、10-50mg/ml融合蛋白，约6-6.5的pH。更具体的实施方案中，稳定的液体制剂包括5mM磷酸盐缓冲剂、5mM柠檬酸盐缓冲剂、100mMNaCl、20％蔗糖、25mg/ml融合蛋白，约6.0的pH。此外，可以存在聚山梨酸酯，例如0.05-0.15％聚山梨酸酯20。本发明的VEGF特异性融合蛋白拮抗剂的稳定液体制剂以25mg/ml的VEGF制剂在-80℃贮藏约6个月后几乎没有呈现出沉淀并且在5℃贮藏6个月后几乎没有沉淀。

第二个方面中，本发明的特征在于VEGF拮抗剂的高浓度稳定液体制剂，该制剂包括1-50mM组氨酸、25-150mM NaCl、5-30％蔗糖、50-100mg/ml融合蛋白，约6-6.5的pH，和0.1-0.5％聚山梨酸酯或1-5％PEG。更具体的实施方案中，高浓度稳定液体制剂包括10mM组氨酸、50mM NaCl、5-20％蔗糖、50-100mg/ml融合蛋白，约6.0-6.5的pH，和0.1％聚山梨酸酯(例如，聚山梨酸酯20)或3％PEG(例如，PEG3350)。本发明的VEGF特异性融合蛋白拮抗剂的高浓度稳定液体制剂在5℃贮藏15个月后(70或100mg/ml VEGF捕集蛋白)呈现出少于约3％降解或在24个月后(50mg/ml)少于约1.5％降解。

第三个方面中，本发明的特征在于血管内皮生长因子(VEGF)特异性融合蛋白拮抗剂冻干前制剂，包括(i)含有基本上由第一个VEGF受体的免疫球蛋白样(Ig)结构域2和第二个VEGF受体的Ig结构域3构成的受体成分和多聚化成分的融合蛋白，(ii)缓冲剂，(iii)有机助溶剂或增量剂，和(iv)一种或多种冻干保护剂(lyoprotectant)。各种不同的实施方案中，缓冲剂是组氨酸，有机助溶剂或增量剂是PEG，且冻干保护剂是甘氨酸和蔗糖中的至少一种。一个实施方案中，本发明的冻干前制剂不含有防腐剂。