[发明专利]预防山羊传染性胸膜肺炎的双价二联油乳剂灭活疫苗及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽用油乳剂灭活疫苗及其制备方法，特别涉及一种预防山羊传染性胸膜肺炎的双价二联油乳剂灭活疫苗及制备方法，属于兽用生物防治技术领域。

背景技术

山羊传染性胸膜肺炎是我国当前山羊养殖生产中危害较为严重的一种条件性传染病，其致病原主要为绵羊肺炎支原体“Y₉₈”和丝状支原体山羊亚种“P_G3”。国内实验研究表明，“Y₉₈”主要流行于我国西北、东北等地区，“P_G3” 主要流行于西南、华南等地区。由于该病的流行特点在我国存在地域上的显著差异，目前国内尚无统一的疫苗制品。近年来，随着日益增长的市场需求和养殖规模的不断扩大，加大了全国各地区间的种群流动和商品流通，各地方致病原拟将随种间流动而改变山羊传染性胸膜肺炎原有的流行规律及发病特性；近年的血清学诊断及流行病学调查研究表明，多菌株的交叉感染现象在各地区已逐步显现出来，拟为该病的有效防控提出了新的要求。根据贵州省畜牧兽医研究所1999—2010年期间对贵州山羊传染性胸膜肺炎的血清学诊断、流行病学调查以及病原分离鉴定研究表明，其丝状支原体山羊亚种“P_G3”阳性感染率为28.33—38.3%，绵羊肺炎支原体“Y₉₈”阳性感染率为15.8％，P_G3与Y₉₈的交叉感染率达13.8％，其临床发病率达20—30%左右，同时，贵州省畜牧兽医研究所也先后从儗似发病羊只病理组织中分离出致病原丝状支原体山羊亚种“P_G3”和绵羊肺炎支原体“Y₉₈”致病株。由于国内目前应用的山羊传染性胸膜肺炎预防疫苗使用效果并不理想，致使该病至今未能得到有效防控，特别是在每年的冬、春季节，山羊传染性胸膜肺炎仍呈高发态势，严重制约了山羊产业的发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对预防山羊传染性胸膜肺炎具有良好免疫特异性及使用安全性的双价二联油乳剂灭活疫苗及制备方法。

本发明是这样实现的：预防山羊传染性胸膜肺炎双价二联油乳剂灭活疫苗特异性免疫抗原：绵羊肺炎支原体“Y₉₈”毒株和丝状支原体山羊亚种贵州地方株“贵罗P_G3”毒株，每毫升含菌量分别为10×10⁶—10×10¹⁰活菌。

经优选后的标准抗原量为：每毫升Y₉₈  ≥10×10⁹活菌，“贵罗P_G3”≥10×10⁹活菌。

一种预防山羊传染性胸膜肺炎的双价二联油乳剂灭活疫苗的制备方法：其制备步骤为：

（1）灭活疫苗的制备

①菌株复壮：分别取“贵罗P_G3”、“Y₉₈”冻干毒株于健康山羊气管内注射，复壮观察，待发病7-10天后，剖取接种山羊肺、淋巴、胸水等病变组织制成含菌母液；

②母液二次接种健康山羊，待发病7-10天后，取肺、淋巴、胸水等病变组织接种于选择性支原体培养基，分离提取复壮菌株；

③复壮菌株扩大培养，制成菌液，经检测和细菌计数每毫升“贵罗P_G3”、“Y₉₈”活菌分别不低于10×10⁹；

④灭活：将菌液按0.3%比例加入福尔马林溶液，18℃灭活48h，经无菌检验合格后作为免疫抗原；

⑤水相制备：取合格菌液与土温-80按1：0.05混匀；

⑥油相制备：94%柏油与6%司本-80混匀后加入2%硬脂酸铝；

⑦灭活油乳剂制备：取油相2份、水相1份进行碾磨乳化。

（2）安全检验：用实验兔、豚鼠按每只2-3ml肌肉注射灭活苗，观察10日无异常。

（3）效力检验：选择健康实验山羊分别在第7d、15d进行2次免疫接种，第25d颈静脉采血分离血清，检测免疫阳性抗体。

（4）攻毒试验：对免疫山羊每只按100亿活菌量气管内注射，观察25-30d无异常。

（5）疫苗分装：在不低于10万级生物净化GMP生产车间条件下无菌密闭封装。

（6）储存条件：2—8℃恒温冷藏保存。

用法与用量：皮下或肌肉注射。成年羊5ml/只，小羊3ml/只，一年注射2次。