[发明专利]GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11及其制备方法和应用

权利要求书

1.GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11，于2011年11月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5426。

2.权利要求1所述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11分泌的单克隆抗体。

3.权利要求1所述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11的制备方法，其特征在于步骤如下：以GPC3蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，取血清效价在1:10⁴以上的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，用含20wt%小牛血清的HAT RPMI-1640培养基筛选融合细胞，用GPC3蛋白包被ELISA板，间接ELISA法筛选融合细胞培养上清液，选择效价最高的杂交瘤细胞株进行亚克隆化，有限稀释法反复克隆至100%细胞阳性率，最后获得GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11。

4.根据权利要求3所述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11的制备方法，其特征在于所述GPC3蛋白为重组蛋白，具体制备方法为：以SEQ ID NO:1~2所示序列为上下游引物，以Huh7细胞总RNA反转录的cDNA为模板，PCR法扩增GPC3基因，扩增产物用EcoRⅠ和 SalⅠ进行双酶切，酶切产物与经过同样双酶切的载体PET-11b连接，得到重组载体GPC3/PET-11b，转化大肠杆菌，IPTG诱导表达，表达产物经纯化得到GPC3重组蛋白。

5.根据权利要求3所述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11的制备方法，其特征在于小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合用50 wt % PEG-4000。

6.权利要求2所述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11分泌的单克隆抗体在检测GPC3蛋白表达中的应用。

7.一种GPC3免疫检测试剂盒，其特征在于包括权利要求2所述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11分泌的单克隆抗体。