[发明专利]玫瑰黄链霉菌的一个负调控基因及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说，涉及玫瑰黄链霉菌（Streptomyces roseoflavus）Men-myco-93-63的 nsdB_mgh 基因、制备方法及其应用。

背景技术

棉花黄萎病、棉花枯萎病和棉铃虫是棉花生产上的重大病虫害，随着抗虫棉和抗枯萎病品种的利用，棉铃虫和棉花枯萎病均得到了有效的控制。但棉花黄萎病作为一种世界性的、典型的土传病害，其防治始终是世界性难题，至今尚无抗病品种或效果明显的防治药剂和方法。该病害遍及几十个植棉国，已成为世界棉花生产上的最主要威胁。九十年代后该病害在我国各产棉区不断爆发和流行。目前我国每年棉花种植面积约8000万亩，黄萎病发病面积达3000多万亩，重病田2000万亩，每年损失皮棉约10万吨，折合人民币14亿元。河北省每年植棉面积约1000万亩，发病面积300多万亩，损失约1.4亿元。随着人们环保意识的增强，生物防治因其对环境、生态和人类健康安全的优点，在世界各国得到了广泛的重视并发挥着越来越重要的作用。利用生物防治方法控制棉花黄萎病也越来越受到人们的重视。国内外虽均有利用活菌进行防治棉花黄萎病研究的报道，但因为活菌易受环境条件、土壤因素等影响，防效不稳定，在生产上很少应用。利用生防菌产生的抗生素或其它代谢产物防治该病害可以减轻或避免上述不利因素的影响。抗生素在农业上的应用开始于本世纪50年代，美国的科学家利用链霉素、土霉素及二者的混合物“农霉素”防治果树和蔬菜病害，取得了很好的防治效果。我国在利用抗生素防治植物病害方面也取得了很大进展。井岗霉素在防治水稻纹枯病上的大规模应用已取代了化学农药的防治，且连续使用多年尚未发现病原菌产生抗药性。但当前的生产中未发现利用抗生素防治棉花黄萎病的报道。

本研究小组已经独立发现并从土壤中分离得到生防链霉菌菌株Men-myco-93-63，在室内及大田实验中，已经证实该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌、番茄灰霉病菌、瓜类白粉病菌等十几种重要植物病原菌的生长均表现很强的抑制作用（ Liu D Q, Anderson N A, Kinkel L L. Selection and characterization of Streptomyces suppressive to the potato scab pathogens. Canadian Journal of Microbiology, 1996, 42(5): 487-502； 刘大群, 杨文香, 祁碧菽, 等. 拮抗链霉菌 Men-myco-93-63 及其发酵液对棉花黄萎病菌生长的影响. 河北农业大学学报, 1999, 22(4): 79-82；郭敬华,孟庆芳,李亚宁,等.玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63发酵液对黄瓜白粉病抗性的影响.华北农学报,2007,22(s), 1~4.； 孟庆芳,张汀,刘大群.番茄灰霉病生防菌的筛选与研究.中国生物防治,2005,21:139~144.）。经16S r RNA序列分析及120bp的γ可变区BLAST比较，结合形态学及生理生化特征分析，将该菌株鉴定玫瑰黄链霉菌（Streptomyces roseoflavus）（微检2005年A001号）。

另外，本研究小组已在Men-myco-93-63菌株中克隆得到了nsdA_mgh基因（沈凤英, 刘力强, 吴伟刚, 等. 玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 负调控基因 nsdA_mgh的克隆及序列分析. 华北农学报, 2009, 24(5): 77-80），试验表明，阻断该负调控基因后，突变株在摇瓶水平上对棉花黄萎病菌的抑制能力提高了一倍（沈凤英. 玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 接合转移体系及 nsdA 基因的研究. 河北农业大学, 硕士学位论文, 2009）。

基于上述研究成果，本发明人进一步深入研究Men-myco-93-63菌株，得到另一种负调控基因nsdB_mgh基因。

发明内容

本发明的目的在于提供一种玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 nsdB_mgh基因。

本发明的第二个目的在于提供上述玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 nsdB_mgh基因的制备。