[发明专利]用于生产脂肪酶的方法、能产生所述脂肪酶的转化解脂耶氏酵母细胞以及它们的应用

权利要求书

1.一种用于生产重组体脂肪酶的方法，其包括：

a)培养用载体转化的解脂耶氏酵母细胞的步骤，所述载体包含用于表达酵母耐酸脂肪酶的表达盒，所得到的解脂耶氏酵母细胞是名为YL-LIP2-6C的克隆，所述克隆于2005年12月15日保藏在法国培养物和微生物国家保藏中心(C.N.C.M.)，保藏编号为I-3542；以及

b)从培养液上清液中回收用所述YL-LIP2-6C细胞生产的所述重组体脂肪酶的步骤，

该方法的特征在于，

用于培养的步骤a)是在不含由动物来源的蛋白质材料或它们的酶消化产物所组成的动物来源的产物或未被表征的混合物的培养基中进行的；并且

所述培养基包含：

-作为氮源的无机氮；

-碳源，其选自于碳水化合物来源的碳源、多元醇、以及脂类来源的碳源；以及

-无机盐和维生素；并且

所述步骤a)包括：

a1)在含有碳水化合物来源的碳源的培养基中预培养所述YL-LIP2-6C细胞；

a2)发酵步骤，包括在含有碳水化合物来源的碳源的培养基中的细胞生长期，以及在含有脂肪酸作为唯一碳源的培养基中的脂肪酶生产期。

2.如权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述无机氮是硫酸铵。

3.如权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述脂肪酸是油酸。

4.如权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述发酵在15％～25％的恒定pO₂和pH小于6.5的条件下进行。

5.如权利要求1所述的生产方法，其特征在于，进行用于预培养的步骤a1)直至OD_600nm值为3～10每1mL，在用于发酵的步骤a2)中，当所述培养液的OD_600nm值达到60～80每1mL时，开始所述脂肪酶生产期。

6.如权利要求1所述的生产方法，其特征在于，当所述OD_600nm值达到300～350每1mL时，进行收集所述脂肪酶的步骤b)。

7.如权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤b)包括：

b1)从所述培养液上清液中分离所述脂肪酶；以及

b2)纯化步骤b1)中得到的脂肪酶。

8.如权利要求7所述的生产方法，其特征在于，采用从中空纤维切向过滤、正面过滤、和连续式或分批式离心中选出的技术来进行所述分离，采用从过滤、分级沉淀、离子交换层析、疏水交互作用层析、和凝胶过滤层析中选出的技术来进行所述纯化。

9.一种被载体转化的解脂耶氏酵母细胞，所述载体包含酵母耐酸胞外脂肪酶的表达盒，其特征在于，所述细胞是名为YL-LIP2-6C的克隆，所述克隆于2005年12月15日保藏在法国培养物和微生物国家保藏中心(C.N.C.M.)，保藏编号为I-3542。

10.如权利要求9所述的细胞用于生产所述酵母耐酸脂肪酶的应用。