[发明专利]一种藻蓝蛋白的纯化技术

说明书

技术领域

本发明涉及到生物技术领域。

背景技术

21世纪以来藻蓝蛋白的作用备受关注，尤其是关于藻蓝蛋白的提取和纯化方面的研究很多，但是在已知的技术中藻蓝蛋白的纯度得率不高。日本DIC是世界上以及有些文献中发表的方法，则完全局限于实验室规模，包括盐析、凝胶过滤，吸附色谱，离子交换色谱，以及其它更昂贵的方法，这些方法大多不适于制备食品色素级的产品。这些方法首先成本高，第二得到的纯度不高。随着藻蓝蛋白荧光试剂的深入研究和进一步的推广使用，要实现藻蓝蛋白在荧光探针等生物化学领域的运用，必需做到提取成本相对降低和纯度达到很高的要求。

发明内容

本发明就本着降低荧光剂藻蓝蛋白的提取成本的降低及高纯度的要求而提出，使荧光剂藻蓝蛋白的应用更加广泛。

为达到以上目的，本发明采用以下方法，以鲜藻或螺旋藻粉为原料，首先提取藻蓝蛋白粗滤液，原料脱水后，加入去离子水，混匀，然后置-20℃～-10℃冰冻，冻结后，取出置35℃融溶，冻融3-4次，用120目纱布过滤；其次是进行离心分离，得到上清液，纯度为1.0左右；上清液进行双水相萃取再进行超滤分离纯化，最后进行冷冻干燥，得到的藻蓝蛋白的浓度能达到4.0以上，最后置于3-5℃保藏。具体步骤如下：

A、提取粗提液，采用冻融法处理鲜藻或藻粉，在冷冻过程中，藻细胞周围的水先结冰，通过物理变化从而使螺旋藻细胞破裂，藻细胞内的藻蓝蛋白溶出。

B、首先进行120目纱布过滤，出去体积较大的杂质，接着对滤清液进行3000r/min离心，得上清液，纯度达到0.6以上。

C、双水相萃取-超滤分离纯化技术，通过双水相的萃取，进一步分离藻蓝蛋白和其他蛋白，从而提高藻蓝蛋白的纯度，接着使用超滤技术，得到纯度很高的藻蓝蛋白≥4.0。

D、在温度为5℃的低温条件下进行冷冻自然干燥，是水分≤7.0％。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：方法简便，纯化效率和浓缩效率高，能很大提高藻蓝蛋白的经济效益，同时在整个图区纯化过程无添加对环境污染的化学及其他元素，具有社会、环境和经济效益。

具体实施方式

1、提取粗提液。取螺旋藻藻鲜藻，加等体积的去离子水，混匀，然后置-20℃～-10℃冰冻，待冻结之后，取出置室温下使之融溶，冻融处理3-5次，绝大部分藻蓝蛋白被从细胞内提取出来。

2、然后利用120目纱布过滤，得到滤清液进行离心分离，使粗提液与其他杂志分离，得到的藻蓝蛋白纯度为0.6以上。

3、双水相萃取-超滤分离纯化技术，通过双水相的萃取，进一步分离藻蓝蛋白和其他蛋白，从而提高藻蓝蛋白的纯度，接着使用超滤技术，得到纯度很高的藻蓝蛋白≥4.0，纯度提高到原来600倍以上。

4、在温度为5℃的低温条件下进行冷冻自然干燥，是水分≤7.0％，至此，产品纯度已达到荧光剂藻蓝蛋白标。