[发明专利]一种东方百合杂种胚的培养方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种东方百合杂种胚的培养方法。

背景技术：

百合是一种重要的观赏植物，具有较高的经济价值。其中麝香百合(Longiflorum)、亚洲百合(Asiatic)、东方百合(Oriental)及喇叭百合(Trumpet)是商业上最重要的百合四大杂种系，各具有独特的优良性状。东方百合花大，花色鲜艳并具有浓郁的香味，而且对灰霉病(Botrytis)有着很强的抗性，是目前国内最受欢迎的百合切花品系。然而目前市场上出售的切花品种都是从国外引进的品种，我们还没有自己的商品品种，因此选择已引进的东方百合优良品种进行杂交是进行品种改良和快速繁殖优良百合品种的有效途径。综合不同杂种系间的优良性状已成为百合育种中的一个重要目标，但是远缘杂交不亲合阻碍了百合育种的进一步发展。百合远缘杂交存在受精前及受精后两种障碍，受精后的障碍主要表现在受精后幼胚发育不完整，杂种种子发育不全，播种后都不能发芽生长，百合杂种胚培养技术能够有效解决受精后障碍。

发明内容：

本发明就是针对上述问题，提供了一种育种效果好、育种周期短的东方百合杂种胚的培养方法。

为了实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案，对东方百合杂种系授粉后，将其小胚、胚珠或子房切片剥离进行离体培养。

具体的培养步骤为，

(1)以东方百合杂种系为材料，定植在温室中培养至开花；

(2)取东方百合的开花株，对其授粉，授粉30-40天后，将其获得的蒴果取下进行灭菌处理；

(3)在培养皿中将杀过菌的蒴果剥开，将小胚、胚珠或子房切片接种在培养基中，接种比例为1∶20～30(g/ml_培养基)，然后放置在温度为23～27℃的培养室内培养15～45天即可发芽，发芽后继续培养3～4个月后培养成完整植株。

小胚、胚珠经过15天的培养即可发芽；

子房切片培养30天可明显看到膨大的胚珠以后，剥离出来继续培养15天即可发芽。

在培养皿中将杀过菌的蒴果一侧剥开，看一看蒴果的腔室中胚珠的发育状态，有的明显能看到线状的小胚，就直接剥出来培养；有的胚珠已经成熟不容易剥离小胚，就采取直接接种胚珠培养的方法，有的只能看到水状的胚珠，有透明的种皮包着，看不到胚；有的连胚珠也看不到的，就采取子房切片培养的方法；

步骤(2)中，用亚洲百合杂种系对东方百合杂种系进行授粉。

步骤(2)中所述的灭菌方法为，先将蒴果在75％的酒精中浸泡1-2秒，然后用镊子夹着放到酒精灯火焰上方撩烧，进行表面杀菌。

步骤(3)中将小胚进行离体培养所用的培养基为1/2MS+BA0.05～0.2mg/l+NAA 0.05～0.2mg/l+蔗糖50000mg/l。

步骤(3)中将胚珠进行离体培养所用的培养基为1/2MS+BA0.05～0.2mg/l+蔗糖40000mg/l。

步骤(3)中将子房切片进行离体培养所用的培养基为MS+NAA0.1～0.3mg/l+蔗糖30000mg/l。

本发明的有益效果：

本发明通过人工配制的培养基提供杂种幼胚营养，使之继续生长发育直至成苗。杂交子房、胚珠和杂交幼胚离体培养是目前克服受精后障碍的有效方法，其中以幼胚离体培养成功几率最大。幼胚离体培养被广泛地用来挽救在胚胎发育的中后期败育或不成熟的种间杂种胚。

通过杂交授粉子房及幼胚的离体培养可在胚败育之前将其取出培养，避免远缘杂种胚早衰，有效解决百合受精后障碍，使大量远缘杂交胚继续发育成正常种子，尽快进入选育程序，缩短了育种周期，同时获得了大量的远缘杂交后代，实现了百合属种间远缘杂交，创造了一批新种质，胚挽救技术与百合瓶内结球技术的结合，有效缩短了百合杂交后代的培育周期和调高了杂种成活率。

具体实施方式：

实施例1

以东方百合杂交系品种‘索邦’为母本，以亚洲百合杂交系品种‘里诺’为父本，将授粉后36天获得的蒴果切下，在超净工作台上将其进行表面杀菌处理，即先将蒴果在75％的酒精中浸泡1-2秒，然后用镊子夹着放到酒精灯火焰上方撩烧，进行表面杀菌。接着在培养皿中将杀过菌的蒴果一侧剥开，将小胚直接剥出来，接种到组成为1/2MS+BA 0.1mg/l+NAA 0.1mg/l+蔗糖50000mg/l培养基中，接种比例为1∶20g/ml，接着放置在温度为23℃的培养室内培养15天后成功发芽，继续培养3个月后培养成完整植株，培育成百合新品种‘芳馨’。应用上述培养方法杂种成活率达91％。