[发明专利]一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂、其制备方法及应用

权利要求书

1. 一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂，其特征在于：所述微生物制剂的活性成分为红色诺卡氏菌ATCC11653和珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100。

2.一种用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：由红色诺卡氏菌ATCC11653和珊瑚色诺卡氏菌ACCC40100组成混合菌，采用氮源、碳源及无机盐组成发酵培养基进行发酵培养，在发酵培养完成后，加工成固体粉剂, 制得具有降低养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮的含量，拮抗罗非鱼链球菌病病原，提高罗非鱼机体的免疫力，防治罗非鱼链球菌病作用的固体粉剂型微生物制剂。

3.如权利要求2所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

（1）微生物菌种：

菌种A：红色诺卡氏菌ATCC 11653；

菌种B：珊瑚色诺卡氏菌ACCC 40100；

混合菌：将菌种A和菌种B混合，以细菌细胞干重计配比比例，菌种A：菌种B为1：0.5～2；

（2）培养基：

获得大的生物量的通用培养基：以无机氮源和有机碳源作为营养物质；通用培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，可溶性淀粉25g/L，硫酸铵5g/L，磷酸氢二钾0.85g/L，pH7.5；

检测菌种用的固体培养基是在上述通用培养基中加入2%重量百分比的的琼脂；无指明情况下均是采用通用培养基培养；

（3）菌种发酵制备：

a）摇床培养：将斜面保存的菌种A和菌种B接入装有通用培养基的三角瓶中，通用培养基量为三角瓶容量的1/3，菌种A和菌种B的混合量按混合菌的配比配置，接种量以标准接种环挑满为准；摇床培养12～18h，控制培养温度30～35 ℃，pH 7.5～8.5，转速130～180rpm；

b）种子发酵：接种量6-20mL/L，从摇床培养的三角瓶中接种进50～200L种子发酵罐，采用通用培养基发酵培养，控制发酵温度30～35℃，pH7.5～8.5，种子发酵罐搅拌转速130～180rpm，发酵时间48～120小时，待活菌数在5×10⁹～8×10⁹个/mL时；发酵产物直接制备成制剂或作为种子进一步进行发酵罐发酵；

c）发酵罐发酵：种子发酵产物作为种子接种入500-2000L发酵罐，进行发酵罐发酵，仍然采用通用培养基，发酵条件同种子发酵罐发酵；

（4）固体粉剂的制备：发酵培养后的发酵液通过干燥制备成一定粒度的固体粉剂。

4.如权利要求3所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，固体粉剂采用真空干燥方法制得，具体操作为：发酵培养后的发酵液添加吸附载体，发酵液：吸附载体重量比为1： 2～5，吸附后进行干燥处理；根据干燥温度、通风情况和铺陈厚度，干燥时间为8～30 小时，得吸附粉；干燥后的吸附粉，根据对活菌数的要求添加同类型吸附载体进行稀释处理，吸附粉：吸附载体重量比为1：1～10，活菌含量在1×10⁸～2×10⁸个/g。

5.如权利要求3所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，固体粉剂采用低温干燥方法制得，具体操作为：发酵培养后的发酵液采用离心机在5000～8000rpm下离心10～15min，收集离心后的沉淀菌体，添加保护剂后进行低温冷冻干燥处理，制备成冻干粉，所述低温温度为-80℃；冷冻干燥后的冻干粉，根据对活菌数的要求添加吸附载体进行稀释处理，冻干粉：吸附载体重量比为1：1～1000，活菌含量在1×10⁸～2×10⁸个/g。

6.如权利要求4或5所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述吸附载体选用膨润土、麦麸、次粉或淀粉。

7.如权利要求5所述的用于防治罗非鱼链球菌病的微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述保护剂选用海藻糖、蔗糖、牛血清蛋白、牛奶中的一种或几种。

8.一种按权利要求1所述的微生物制剂在防治罗非鱼链球菌病方面的应用，其特征在于：所述微生物制剂用于罗非鱼养殖池塘，用量为0.5～1.0Kg/亩·米水深。