[发明专利]一种食品中罗丹明B高效检测方法及快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种食品中罗丹明B高效检测方法及快速检测试剂盒。 

背景技术

罗丹明B，也称玫瑰红B，俗称花粉红，是一种碱性荧光染料。其作为荧光试剂已被广泛用于矿业、环保以及钢铁等领域，是荧光分析常用的试剂，但是，某些食品中却被检查出含有罗丹明B染料。由于，其具有潜在的致癌和致突变性，我国和欧盟等国都不允许在食品中添加使用。因此，对食品进行罗丹明B的检测是及其重要而势在必行的。 

对食品中罗丹明B的检测，大都采用高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法和气相色谱法，但至今还没有更高效快速的方法报道。我国于2010年颁布的出入境检验检疫行业标准“进出口食品中罗丹明B的检测方法”， 就是采用液相色谱检测以及液相色谱-质谱／质谱检测，该方法充分体现出液质联用技术的优势，但是，因其在实际操作中，前处理的方法过于繁琐，特别是ＧＰＣ 净化的使用，不仅增加了检测的工作量，而且效率也不很显著，还有有机溶剂的使用，如环己烷，既有毒又有害，大量使用会严重影响环境，不利于环境保护，此种方法因其自身的原因，使其在检测机构中大量的应用受到了限制。最近，还有其他方法，有报道酶联免疫吸附法可用来检测食品中的罗丹明B，此种方法虽然能够大量检测食品中的罗丹明B，但是，其准确度和灵敏度都不及高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法和气相色谱法。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单，效果好的食品中罗丹明B高效检测方法及快速检测试剂盒。 

本发明首先提供了一种食品中罗丹明B的快速检测试剂盒，包括： 

（1）    提取剂1：由乙腈、乙酸和甲酸铵组成，其中乙腈所占体积比例为90-99%；乙酸和甲酸体积比为1:1；

（2）    提取剂2：由中性氧化铝、酸性氧化铝、碱性氧化铝按1:1:1的质量比例组成；

（3）    固相萃取柱：固相萃取柱的填料按以下方法制备：将填料PEP、PSA和C18，按质量比2:2:1的比例混合灌柱。

本发明还提供了一种食品中罗丹明B高效检测方法，利用上述的快速检测试剂盒对待测食品样品进行如下步骤检测： 

1)取5 g样品于50 mL具塞塑料离心管中，加入20 mL提取剂1，以8000 rpm/min均质2 min，加入5-10 g提取剂2，振荡1 min，4500 rpm/min离心10 min；

2) 取5 mL上清液， 加入10 mL水稀释，制备成15 mL 样品液；

3) 将15 mL 样品液过固相萃取柱，抽真空，用5 mL体积分数为 20%的乙腈水溶液淋洗；

4)  2 mL 含1-5%（v/v） 冰醋酸的乙腈溶液洗脱，洗脱液加入0.5 mL 0.1mol/L 乙酸铵溶液，定容至2.5 mL；

5) 过滤，上机检验，采用高效液相色谱或高效液相色谱-质谱联用技术检测。

所述固相萃取柱的填料按以下方法制备：将填料PEP、PSA和C18按2:2:1的质量比混合，灌柱子60-200 mg；填料的平均粒度50μm，平均孔径60 埃。 

所述高效液相色谱的条件为色谱柱：C18柱，粒度 5 μm；流动相：乙腈：5mmol/L乙酸铵水溶液按体积比=75：25；流速，0.2 mL/min；柱温，35 ℃；进样量，10 μL。 

其中，提取剂1和提取剂2的联合使用尽可能地提取食品中的罗丹明B，固相萃取柱的使用，不但减少了样品液对机器的离子抑制，而且还大大提高了提取与回收，运用此柱子，可使回收率稳定在85%以上。 

本发明涉及的提取剂1和提取剂2的使用，不局限于本发明给出的定量数量，只要按照此配比，可制备成不同的产品形式；固相萃取柱也不局限于本发明中涉及的灌注填料的数量。可以根据提取剂1和提取剂2的使用，配合改变柱子的规格与填料的数量。 

本发明涉及的罗丹明B快速检测试剂盒包括提取剂1、提取剂2和固相萃取柱，对样品进行处理，采用该试剂盒的高效检测方法，可快速检测食品中的罗丹明B的含量，包括但不限于腊鱼、腊肉、香肠、果汁、果酱、葱头、糖果、话梅、辣椒粉及饼干等中罗丹明B的测定。其中，测定后的数据用如下方法来计算： 

其中：

X        测试样品中罗丹明B的含量，μg/kg；

N        测试样品稀释倍数；

C        标准曲线中获得的样品中罗丹明B的浓度，ng/nL；