[发明专利]豆类植物高效体胚发生与植株建成

权利要求书

1.一种制备豆类植物体细胞胚胎的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)提供豆类植物的子叶切块，并对所述子叶切块进行诱导，获得胚性愈伤组织；和

(2)对获得的胚性愈伤组织进行诱导，获得体细胞胚胎。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述子叶切块切过的周长占总周长的至少50％，较佳地60％，更佳地为100％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的诱导为：将子叶切块接种于含2，4-D和蔗糖的MSB培养基中培养。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述诱导为：将步骤(1)获得的胚性愈伤组织接种于含2，4-D、AgNO₃和蔗糖的MSB培养基中进行培养。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤：

(3)以步骤(2)获得的体细胞胚胎作为受体，转入外源基因，从而获得转基因的体细胞胚胎。

6.一种制备豆类再生植株的方法，其特征在于，包括步骤：

将权利要求1-5任一方法制备的体细胞胚胎诱导为再生植株。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)对体细胞胚胎进行扩增，获得扩增的体细胞胚胎；

(ii)对步骤(i)扩增的体细胞胚胎进行体细胞胚胎成熟和分化培养，获得成熟和分化的体细胞胚胎；和

(iii)对步骤(ii)获得的成熟和分化的体细胞胚胎进行干化和萌发培养，获得有根的再生植株。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，还包括步骤(iv)：

(iv)将步骤(iii)获得的有根的再生植株进行炼苗培养和移栽。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(i)所述的扩增为：将体细胞胚胎接种于含2，4-D、AgNO₃和蔗糖的MSB培养基中培养。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(ii)所述的成熟和分化培养为：将步骤(i)获得的扩增的体细胞胚胎接种于含ABA、麦芽糖和活性炭的MSB培养基中。

11.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(iii)所述的干化和萌发培养包括步骤：

(A)将步骤(iii)获得的成熟与分化的体细胞胚胎置于含麦芽糖和活性炭的MSB薄层培养基培养，获得进一步成熟、分化与干化的体细胞胚胎；

(B)将步骤(A)获得的体细胞胚胎接种于含蔗糖的MSB培养基中，进行体细胞胚胎萌发培养，获得再生植株。

12.如权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述的豆类选自下组：大豆、豌豆、蚕豆、绿豆、菜豆、芸豆或赤豆。