[发明专利]一种防治根瘤线虫的菌株培养液及其制备方法

权利要求书

1.一种防治根瘤线虫的菌株培养液，其特征在于，其主要组成为名称为Photorhabdus temperata. subsp. Temperate的菌株。

2.一种权利要求1所述的防治根瘤线虫的菌株培养液的制备方法，其特征在于，昆虫病原性线虫(Heterorhabditis bacteriophora)先后经过粉碎、分离、接种培养、提取后得到所述的菌株培养液。

3.根据权利要求2所述的防治根瘤线虫的菌株培养液的制备方法，其特征在于，具体的制备步骤为，

（1）粉碎、分离

将昆虫病原性线虫(Heterorhabditis bacteriophora)置于含链霉素0.06wt%的NaClO溶液中进行30～40min的消毒，每500～800只昆虫病原性线虫用300ppm的上述NaClO溶液；

消毒后用匀浆机将线虫全部磨碎，磨碎后的浆液置于琼脂培养基（MacConkey agar）中，将发出粉红色荧光的这部分细菌取出，置于NBTA培养基中进行二次分离，最后将围绕群体白带的绿色群体取出备用；

（2）接种培养

将步骤（1）得到的菌种按2.0%的接种量接种到5wt%的YS培养基中，在25～35℃、250～350rpm的条件下培养3～5天，然后将培养基中的红色群体取出备用；

（3）提取

向步骤（2）得到的群体中加入2倍体积的2-异丙醇，用超声波处理1-2小时，在4℃下放置24小时，除去培养液其它多糖类物质；

接着将培养液置于离心分离机中，以12,000xg进行40分钟的离心分离，以GF/F滤纸滤去细胞后即得所述的菌株培养液。

4.根据权利要求3所述的防治根瘤线虫的菌株培养液的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的琼脂培养基的组成及配比为，1L蒸馏水中，含蛋白胨17g，蛋白间质蛋白胨3g，乳糖酶10g，氯化钠5g，胆汁酸盐1.5g，细菌用琼脂13.5g，中性红0.03g，结晶紫0.001g；

NBTA培养基的组成及配比为，1L蒸馏水中，含牛肉膏3g，蛋白胨5g, 细菌营养用琼脂15g，溴麝香草酚蓝0.025g，2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）0.04g。

5.根据权利要求3所述的防治根瘤线虫的菌株培养液的制备方法，其特征在于，步骤（2）中的YS培养基的原料为食用油，卵黄粉，胆固醇，猪油，卵磷脂，全脂粉乳，氯化钠，磷酸二氢钾、酵母提取物中的一种以上。

6.根据权利要求3所述的防治根瘤线虫的菌株培养液的制备方法，其特征在于，步骤（3）中的2-异丙醇的温度为0～5℃。