[发明专利]一种用于脑神经保护的药物的组合

说明书

技术领域

本发明涉及一种组合物，具体涉及一种用于保护脑神经的药物组合。

背景技术

益智，别名益智仁、益智子，为姜科山姜属植物，是中医常用药材。现代研究表明，益智具有拮抗钙活性、强心、抗癌、控制回肠收缩及拮抗前列腺素的作用。授权公告号为CN100560718C的中国发明专利记载了益智乙醇提取物的主要成分原儿茶酸对氧化应激损伤的PC12细胞有保护作用，并能促进神经干细胞体外增殖及诱导其分化的作用。但迄今为止，尚未见国内外有对原儿茶酸和白杨素协同保护神经细胞损伤的作用的报导。

发明内容

本发明的目的在于提供一种组合物，该组合物具有保护脑神经的作用，可应用于保护脑神经药物开发。

一种用于脑神经保护的药物的组合物，含有：(a)原儿茶酸和(b)白杨素，(a)与(b)的摩尔比值为4～85∶1。

优选地，本发明的组合物对体外神经细胞损伤保护达到最佳效果时(a)与(b)的摩尔比值约80∶1。

优选地，本发明的组合物在斑马鱼体内神经保护达到最佳效果时(a)与(b)的摩尔比值约4∶1。

本发明的组合物，能在6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤模型中增强细胞活性、减少乳酸脱氢酶释放；在6-羟基多巴胺诱发的斑马鱼体内模型中显著减少多巴胺能神经元的损伤；同时(b)能增强(a)的神经保护作用。该组合物可应用于脑神经保护的药物开发。

附图说明

图1为本发明的组合物对6-羟基多巴胺诱发的PC12细胞损伤的影响，其中，(A)为本发明的组合物对PC12细胞活性的影响，(B)为本发明的组合物对PC12细胞乳酸脱氢酶释放量的影响；

图2为本发明的组合物对6-羟基多巴胺诱发的斑马鱼多巴胺能神经元损伤的影响，(A)为代表性图片显示组合物能显著阻止6-羟基多巴胺诱导的斑马鱼多巴胺能神经元数量减少；(B)为多巴胺神经元定量统计分析结果；

图3为本发明的组合物增加了Nrf2/小时O-1的蛋白质表达，其中，(A)为本发明的组合物12小时内时间依赖地上调了Nrf2/HO-1的蛋白质表达，(B)显示Nrf2/HO-1被组合物诱导的蛋白质表达变化具有浓度依赖性；

图4为本发明的组合物诱导了Nrf2向细胞核转移，并增强了其转录活性，其中，(A)为本发明的组合物显著降低细胞质中Nrf2含量并提高细胞核中Nrf2含量，6-羟基多巴胺单独处理组亦提高Nrf2在细胞核中的表达，(B)显示白杨素、原儿茶酸和白杨素组合可提高Nrf2的转录活性；

图5为Nrf2 siRNA下调了PC12细胞的Nrf2/HO-1的蛋白质表达，并抑制了本发明的组合物的细胞保护作用，(A)显示Nrf2 siRNA显著降低Nrf2的蛋白质表达，以及Nrf2所调节的关键转录蛋白质HO-1的下游信号通路，(B)显示Nrf2 siRNA能特异性抑制本发明组合物在6羟基多巴诱导PC12细胞损伤的保护作用，但Nrf2 siRNA和阴性对照RNA转染本身并未影响PC12的细胞活性。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例子对本发明作进一步详细介绍。

实施例1 PC12细胞的培养

PC12神经细胞为购自美国模式培养物保藏所(ATCC)的大鼠嗜铬细胞瘤细胞。培养基为F-12K基础培养基，含15％(体积百分比)的热灭活马血清、2.5％(体积百分比)的胎牛血清、青霉素(100单位/毫升)和链霉素(100微克/毫升)，细胞培养置于含95％湿度和5％CO₂的37℃的培养箱中，培养基隔天更换一次。

实施例2本发明的组合物对6-羟基多巴胺诱发的PC12细胞损伤的保护作用

1.实验设计及药物处理

原儿茶酸和白杨素分别溶解于二甲基亚砜(DMSO，购自西格玛奥德里奇公司)中，储存液浓度为500mmol/L和12mmol/L，使用时直接稀释于培养基中，DMSO终浓度不超过0.3％。用系列稀释的原儿茶酸或白杨素，或它们的组合物预处理细胞12小时，然后更换含1mmol/L的6-羟基多巴胺新鲜低血清培养基处理8小时诱导PC12细胞损伤，用MTT和乳酸脱氢酶释放法检测细胞活力。

2.PC12细胞损伤的检测方法

(1)MTT法