[发明专利]特异性结合于人心肌肌钙蛋白Ⅰ的DNA适体

说明书

技术领域

本发明涉及特异性结合于人心肌肌钙蛋白I的DNA适体，以及含有所述DNA适体的用于诊断急性心血管疾病的组合物和试剂盒。

背景技术

肌钙蛋白是由三种调节蛋白(肌钙蛋白C、肌钙蛋白I和肌钙蛋白T)组成的一种复合物，所述复合物连接于原肌球蛋白并位于肌肉组织中的肌动蛋白纤维之间的沟槽内，从而调节肌肉细胞的收缩和舒张。Ca²⁺的细胞内水平提高时，Ca²⁺结合于肌钙蛋白C上的特异性位点，从而在肌钙蛋白I中产生构象变化，以使肌球蛋白可结合于肌动蛋白纤维的活性位点，产生肌肉的收缩。在骨骼肌和心肌中均观察到该机能。对心肌发挥作用的肌钙蛋白I和肌钙蛋白T的氨基酸序列的长度与在骨骼肌中表达的相应的氨基酸序列长度不同。

已知心肌肌钙蛋白I的表达水平在急性心血管疾病发作后迅速上升。因此，就急性心血管疾病的初步诊断而言，对该蛋白的检测是非常重要的。

适体为一种结合于特异性标靶的单链DNA(ssDNA)或单链RNA(ssRNA)。得益于适体对特异性标靶的高亲和性和高稳定性，最近它们被广泛地研制并活跃地应用于疾病的治疗以及诊断疾病的传感器中。适体的合成可相对容易，并且可使用细胞、蛋白甚至小的有机物质来作为它们的标靶，这使新的检测方法得以发展。此外，因为适体与先前研制的抗体相比具有更良好的特异性和稳定性，发现适体可在各种领域中广泛应用，包括治疗方法、药物递送系统、用于诊断的生物传感器的研制等等。

为诊断用途而研制的抗体使用免疫系统来制备，因此它们具有制备时间相对长、成本相对高的缺点。此外，与适体、DNA或RNA相比，上述为诊断用途而研制的抗体是具有较低稳定性的蛋白，这可阻碍高度敏感的传感器的研制。

如上所提及的，尽管基于肌钙蛋白I的抗体已研制出多种用于肌钙蛋白I的检测系统，但它们具有许多限制。因此，需要一种更为稳定的、可以低成本操作且可有效诊断初期急性心血管疾病的检测系统。

发明内容

本发明提供特异性结合于人心肌肌钙蛋白I的DNA适体、包含所述DNA适体的用于诊断急性心血管疾病的组合物以及包含所述DNA适体的用于诊断急性心血管疾病的试剂盒。

然而，本发明将要实现的技术目的并非仅仅限于上面提及的目的，本领域技术人员可从下列给出的描述中清楚地理解其他目的。

本发明一方面提供特异性结合于人心肌肌钙蛋白I的适体，所述特异性结合于人心肌肌钙蛋白I的适体的碱基序列选自：SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6。

本发明另一方面提供用于诊断急性心血管疾病的组合物，所述组合物包含特异性结合于人心肌肌钙蛋白I的DNA适体。

本发明又一方面提供用于急性心血管疾病的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒使用特异性结合于人心肌肌钙蛋白I的DNA适体。

由于在特异性和稳定性上比常规用于诊断急性心血管疾病的抗体更加优越，本发明的特异性结合于人心肌肌钙蛋白I的DNA适体可制成生物传感器，所述生物传感器敏感且准确地测定人心肌肌钙蛋白I水平，这大大有助于急性心血管疾病的早期诊断。预期对诊断准确性的提高大有帮助。

附图说明

本发明的上述内容及其他目的、特征及其他优势将从下列结合附图的详细描述中得到更清晰的理解，其中：

图1显示由SDS PAGE所测得的肌钙蛋白I蛋白的表达。

图2显示由SDS PAGE所测得的肌钙蛋白复合物蛋白的表达。

图3显示由凝胶过滤纯化的肌钙蛋白I蛋白的分离。

图4显示由凝胶过滤纯化的肌钙蛋白复合物蛋白的分离。

图5为显示ssDNA适体与肌钙蛋白I的结合强度的图，所述结合强度根据肌钙蛋白I的特异性适体的选择，通过UV分光仪测得。

图6显示SEQ ID NO：1的适体和SEQ ID NO：2的适体的二级结构，所述SEQ ID NO：1的适体和SEQ ID NO：2的适体特异性结合于人心肌肌钙蛋白I。

图7显示SEQ ID NO：3的适体和SEQ ID NO：4的适体的二级结构，所述SEQ ID NO：3的适体和SEQ ID NO：4的适体特异性结合于人心肌肌钙蛋白I。

图8显示SEQ ID NO：5的适体和SEQ ID NO：6的适体的二级结构，所述SEQ ID NO：5的适体和SEQ ID NO：6的适体特异性结合于人心肌肌钙蛋白I。