[发明专利]一种高活性的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白及其活性检测方法

权利要求书

1.天然人甲状旁腺激素(1-34)的氨基酸序列为SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF。

2.权利要求人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白为对天然人甲状旁腺激素(1-34)的R25K26K27进行了突变的蛋白。

3.根据权利要求2中所述的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白为天然人甲状旁腺激素(1-34)的R25突变为Q，K26突变为Q或E，K27突变为E或L的蛋白，其中较为优选的是R25突变为Q，K26突变为E，K27突变为L。

4.根据权利要求3中所述的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白为人工化学合成的或者重组表达的蛋白。

5.根据权利要求4所述的重组表达为以大肠杆菌为代表的原核表达系统或以酵母为代表的真核表达系统以及哺乳动物细胞表达系统。

6.根据权利要求2所述的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白的体外活性检测方法采用的细胞为原代培养的成骨细胞或骨髓细胞、成骨细胞系或成骨细胞株。

7.权利要求6中原代培养的成骨细胞或骨髓细胞来源为小鼠，较为优选的是小鼠股骨骨髓细胞。

8.根据权利要求6中的成骨细胞系或成骨细胞株，其特征是转染了PTH 1型受体的细胞，较为优选的为UAMS-32P细胞系。

9.权利要求3所述的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白活性检测的指标为UAMS-32P细胞特定基因mRNA的相对表达量以及刺激小鼠股骨骨髓细胞分化形成破骨细胞的能力。

10.根据权利要求8中的特定的基因，其特征是：耦联成骨细胞、基质细胞和破骨细胞分化、活化与生物活性的主要细胞因子。

11.权利要求9中特定的基因，较为优选的是护骨素(osteoprotegerin，OPG)、NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand，RANKL)2个基因。

12.权利要求8中mRNA的相对表达量，其检测方法为反转录PCR和实时荧光定量PCR。其中较为优选的是实时荧光定量PCR。

13.权利要求9中刺激小鼠股骨骨髓细胞分化形成破骨细胞的能力是通过对破骨细胞的染色来评价的，较为优选的是耐酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色。

14.权利要求2和3所述的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白在治疗骨质疏松症药物中运用。