[发明专利]真假蜂胶的薄层色谱(TLC)鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及蜂胶的鉴别方法，具体地，本发明涉及一种利用薄层色谱方法鉴别真假蜂胶的方法。

背景技术

蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂(树胶)，混入其上腭腺、蜡腺的分泌物加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。近代研究证明，蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质，使其具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能，对人体有着广泛的医疗、保健作用，现已成为各国科学研究的热点，并成为新兴的保健品倍受推崇。假蜂胶一般是指杨树芽胶或掺了杨树芽胶的蜂胶。杨树芽胶是由人工采集杨树芽，经高温蒸煮熬出芽孢的胶状物质，再经乙醇浸泡提取和浓缩得到的黑色胶状物质。与蜂胶相比，假蜂胶价格低廉，生理活性物质含量得不到保证，不法商家在蜂胶及其制品中掺入杨树胶充当蜂胶出售，使蜂胶产品的安全性也得不到保证。据中国蜂产品协会统计：目前市场上有一半以上蜂胶产品是假的，所以真假蜂胶的辨别是涉及食品安全的大问题。

蜂胶的成分相当复杂，其主要成分是黄酮类化合物。目前，已从蜂胶中分离出20多种黄酮化合物，它是蜂胶中的主要活性物质，约占蜂胶的4.13％。这些黄酮化合物包括黄酮类、黄酮醇类和双氢黄酮类等。属于黄酮类的有白杨素、杨芽黄素、刺槐素、芹菜素、柳穿钱素等；属于黄酮醇类的有良姜素、高良姜素、鼠李素、异鼠李素、鼠李柠檬素、山奈素、岳桦素、槲皮素及其衍生物等，属于双氢黄酮类的有乔松素、松球素、樱花素、异樱花素、柚皮素等。黄酮化合物是一类重要的并且在植物界分布很广的天然化合物。药理学试验证明，此类物质中有许多具有很强的活性，对多种疾病有良好的疗效，医用价值甚高。

目前真假蜂胶鉴别的主要方法为指纹图谱法、分光光度比色测定总黄酮评价法、有机酸含量判断法、GC-MS鉴定成分法、热分析法，肉桂酸与对-香豆酸以及黄酮类含量法、癸烯酸含量法、糖类成分法等。

CN 1221110A采用简单的化验仪器和简便的方法快速鉴别蜂胶是否掺假，主要包括：把盐酸、镁粉加入到蜂胶乙醇溶液中，摇动后呈红色，即为阳性(+)反应，然后把硫酸、高锰酸钾加到蜂胶乙醇溶液中，同时开动秒表，记下紫红色消褪的时间，查表即可得出结论。

CN 101871919 A提供了一种蜂胶与杨树胶的鉴别方法，是用HPLC测定水杨苷来判断蜂胶的真假，从而控制蜂胶质量。

另外还有目测法、总黄酮的碱性铝离子络合鉴别反应、酸性KMnO₄滴定法等等。

现有技术中真假蜂胶鉴别方法普遍具有准确度不高、缺乏量化指标、操作复杂、速度较慢等缺点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种真假蜂胶的薄层色谱(TLC)鉴别方法。本发明通过采用三种不同的溶剂系统的薄层层析(TLC)技术，以待测蜂胶中的生物活性成分黄酮类化合物在层析系统中的色谱行为与真蜂胶的对照品在相同标示浓度相同斑点上样量的情况下及相同实验条件下在层析系统中的色谱行为相对照，并在紫外分析灯下进行荧光斑点面积大小和荧光强度的对比来鉴别真假蜂胶。

所述真假蜂胶的薄层色谱(TLC)鉴别方法主要包括：

(1)选择展开剂为甲苯、乙酸乙酯和冰醋酸的混合液，或苯和乙酸乙酯的混合液，或苯、乙酸乙酯和甲酸的混合液；

(2)采用相同溶剂提取相同重量的真蜂胶及待测蜂胶样品，并将提取液分别配制成相同浓度的样液；

(3)分别将真蜂胶及待测蜂胶样液在相同条件下进行同步点样、展开、干燥；

(4)在366nm波长紫外灯下测试荧光强度及荧光斑点面积并进行对比，若待测蜂胶与真蜂胶荧光强度相比差距在20％以内(包括20％)，则为真蜂胶；若待测蜂胶与真蜂胶荧光强度相比差距在20％以上，则为假蜂胶；或若待测蜂胶与真蜂胶荧光斑点面积相比差距在20％以内(包括20％)，则为真蜂胶；若待测蜂胶与真蜂胶荧光斑点面积相比差距在20％以上，则为假蜂胶。

优选地，薄层层析板在使用前进行活化，其活化温度为90～115℃，例如91℃、92℃、95℃、100℃、110℃、114℃、114.5℃等，特别优选为105℃；活化时间优选为0.3～2h，特别优选为0.5～1h。

优选地，所述薄层层析板为硅胶G薄层板。

优选地，步骤(1)中所述展开剂甲苯、乙酸乙酯和冰醋酸的混合液中各组分体积比为9～11∶2～4∶0.2～0.8，例如9∶4∶0.8、11∶2∶0.2、10∶3∶0.5等，特别优选为10∶3∶0.5。