[发明专利]由可编程性定量检定所处理的样本的图像分析方法和体系

权利要求书

1.一种对样本的至少一个目的区域中至少一个靶标分子的表达进行光学定量的方法，包括：

在所述样本的部位处产生光学可识别的点，其中至少一个点对应于单一靶标分子，

其中所述点的特征在于大小和形状的原位可编程性特征以及至少一个额外的可编程性光学特征，

其中在给定区域内的部位处产生的点的数目代表所述区域内靶标分子总群的部分子群；

对所述样本成像；

在图像内选择至少一个目的区域；

在所述至少一个目的区域内识别至少一个点；以及

在所述至少一个目的区域内对所述点进行定量。

2.如权利要求1所述的方法，还包括评价所述至少一个目的区域内的靶标分子的表达。

3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一个目的区域包括整个样本。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在给定区域内的部位处产生的点的数目代表所述区域内存在的所述靶标分子的局部表达。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述的识别和定量步骤是通过整个目的区域来进行，而不进行背景分离步骤。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一个额外的可编程性光学特征包括荧光、衍射水平、清晰度、色调、强度和饱和度中的至少一者。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中对所述点进行定量包括对所述点计数、测量所述点的总面积、计算单位面积内所述点的密度中的至少一者。

8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中对所述点进行定量包括：计算所识别的候选点的预定光学特征的统计测度；将候选对象的光学特征与计算出的统计测度进行比较；以及至少部分基于比较步骤的结果来调整点计数。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中形状的所述可编程性特征包括球形度、偏心度、紧密性、伸长率、最小最大费雷特比率、圆度、同心环中的至少一者。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中大小的所述可编程性特征包括长度、宽度、直径和面积中的至少一者。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在定量步骤之前选择所述目的区域。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用免疫组化检测体系来进行产生光学可识别的点的步骤。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用非基于抗体的检测体系来进行产生光学可识别的点的步骤。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用酶标记的分子探针检测体系来进行产生光学可识别的点的步骤。

15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中产生光学可识别的点的步骤包括显色染色。

16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中产生光学可识别的点的步骤包括荧光染色。

17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中当在所述样本内的两个不同焦平面深度下成像时，至少选自70%、80%或90%的百分比的点能够以特定的放大倍率被光学识别，并且其中所述两个焦平面深度以如下距离隔开，所述距离是至少选自所述样本的厚度的10%、20%或50%的距离。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中对所述样本成像包括在按微米/像素计的选自0.6～0.9、0.9～1.2、1.2～2.5或2.5～5的范围内的分辨率下产生所述样本的图像，并且至少90%的所产生点在所选分辨率下能被光学识别。

19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中对所述样本成像包括在小于1微米/像素的分辨率下产生所述样本的图像，并且至少选自70%、80%或90%的百分比的所产生的点在所述分辨率下能被光学识别。

20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中识别至少一个点包括鉴定至少两个点的原点；并且

对所述至少一个点进行定量包括基于在两个原点之间测量的至少一个距离计算至少一个因子。

21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中产生所述光学可识别的点的总时间少于100分钟。