[发明专利]活的减毒的细小病毒

说明书

本发明涉及活的减毒的细小病毒，它们的用途，包含这种活的减毒的细小病毒的疫苗以及它们的生产方法。

细小病毒属于单链DNA病毒科。在各种动物如猫、狗和猪中，细小病毒可引起疾病。因为病毒需要活跃分裂的细胞以便复制，感染的组织的类型随动物的年龄而变化。在任何年龄都可以影响胃肠道和淋巴系统，导致呕吐、腹泻和免疫抑制，但是在子宫内或在小于两周龄时被感染的猫中仅看到小脑发育不全，在3周和8周龄之间被感染的小狗中看到心肌疾病。

犬细小病毒(CPV)是在小狗中尤其致命的疾病，约80％致死，在非常年幼的小狗中引起胃肠道损伤和脱水以及心脏综合症。它是通过与被感染的狗的粪便接触而传播的。症状包括嗜睡、严重腹泻、发烧、呕吐、食欲不振和脱水。猪细小病毒在猪中引起被称为SMEDI的生殖疾病，其代表为死胎、木乃伊化、胚胎死亡和不孕。猫泛白细胞减少症，通常被称为猫瘟热，是一种影响猫的病毒感染，由犬细小病毒的近亲猫细小病毒(FPV)引起。猫泛白细胞减少症在小猫中常见，并引起发烧、低白细胞数、腹泻和死亡。小于两周的猫胎儿和小猫的感染引起小脑发育不全。水貂肠炎病毒在对猫泛白细胞减少症的作用中是相似的，除了它不会引起小脑发育不全。不同的细小病毒在水貂和其它鼬科动物中引起阿留申病(Aleutian Disease)，其特征在于淋巴结病、脾肿大、肾小球性肾炎、贫血和死亡。细小病毒的最准确的诊断方法是通过ELISA。通常对猫、狗和猪进行针对细小病毒的免疫。

在DNA水平上，已知犬、猫和猪细小病毒具有高度同源的基因组。犬细小病毒CPV2是一种在狗中引起急性、且有时是致命的肠炎的病毒(Kelly, Aust. Vet. J. 54；593, 1978；Appel等, Vet. Rec. 105；156-159, 1979)。1977年左右首先出现的该病毒可能通过单个衣壳蛋白中少数突变而从在猫中非常密切相关的病毒(即猫泛白细胞减少症病毒(FPLV))产生的；物种跳跃可能涉及在其它食肉动物(如水貂或浣熊)的中间传递(Truyen等, Virology 215, 186-189, 1996)。

早在1979年，出现了CPV2的第一种变异体，被称为CPV2a，随后很快在1984年出现了CPV2b(Parrish等, Science 230, 1046-1048, 1985,和J. Virol. 65；6544-6552, 1991)。

最初的2型病毒现在已经从野外(field)消失，被2a和2b型所替代，尽管这两种类型的相对比例在国与国间有变化(前面的Truyen等；Chinchkar等, Arch. Virol. 151, 1881-1887, 2006；Pereira等, Infect. Genet. Evol. 3, 399-409, 2007)。在衣壳蛋白(VP2)中的氨基酸变化，其特征为从2至2a以及至2b的转变，是非常有限的。在87(Met至Leu)、300 (Ala至Gly)、305 (Asp至Tyr)和555 (Val至Ile)位的替换发生在2至2a的进化中，在426(Asn至Asp)和555(Ile至Val)的替换发生在从2a出现2b中(前面的Parrish等；Truyen等, J. Virol. 69, 4702-4710, 1995)。最近，报道了在555位缺乏Val至Ile替换的2a株(Wang等, Virus Genes 31, 171-174, 2005；Martella等, Virus Genes 33, 11-13, 2006)。似乎单一的氨基酸改变可以区分CPV2a和CPV2b VP2序列。

新近，在意大利出现了病毒株，其中426位的氨基酸(2a中为Asn，2b中为Asp)已经变为谷氨酸(Glu)残基(Buonavoglia等, J. Gen. Virol. 82, 3021-3025, 2001；Martella等, J. Clin. Microbiol. 42, 1333-1336, 2004)。这些被称为CPV2c病毒的Glu 426变异体是在意大利和其他欧洲国家传播的（circulating）并与其它CPV类型共存(Decaro等, J. Vet. Med. B. Infect. Dis. Vet. Public Health 53, 468-472, 2006)，并且也已经在地理上多样的国家如越南和苏格兰分离得到(Nakamura等, Arch Virol.149, 2261-2269, 2004, Spibey等, Vet.Microbiol 128, 48-55, 2008)，这些事实表明它们在至少一定比例的狗群体中具有优势。