[发明专利]来自细胞原生质体的微泡及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及来自细胞（诸如细菌、古细菌、真菌、植物细胞等）原生质体的微泡，及其在治疗、诊断和/或疫苗递送物质到靶细胞和靶组织中的应用。

背景技术

在药物疗法中，药物递送系统(DDS)的目的是辅助药物递送到体内的靶位点以起到治疗效果。如果由于药物的吸收率或生物利用率低，所以药物从体内排泄过快，DDS可用于改变药物释放曲线。只有具有严重副作用的药物需要递送至靶组织或细胞。例如，许多当前市售的抗癌药物表现出对正常细胞及癌细胞的细胞毒性。抗癌药物大量递送至癌细胞或组织会降低给癌症患者在治疗期间带来的痛苦和不便。

20世纪60年代首次使用脂质体以来，已广泛研究其在DDS中的应用。已取得脂质体研究的进展，其与诸如聚乙二醇(PEG)的聚合物共轭散布在膜外，也就是所谓的隐形脂质体，其可以避开人体免疫系统的检测。PEG涂层允许药物递送机制具有更长的循环半衰期。实际上，已研发出了DOXIL，阿霉素的聚乙二醇化的脂质体包裹形式。然而，脂质体及隐形脂质体本身不能将药物递送至靶细胞或靶组织，因为它们不能识别靶细胞或靶组织。为了使脂质体结合至特异性靶标，最近的研究针对将靶向配体给予脂质体，所述配体诸如单克隆抗体，但其都未通过临床试验且并未成功地商业化。

由脂质、自然存在的细胞膜组成的代替人工合成的脂质体已用于研发递送系统。使用在含有药物的介质中生长的微生物分泌的小细胞的药物递送方法已公开[WO 2005/079854，“通过来自细菌的完整小细胞将靶向体外及体内药物递送到哺乳动物细胞的组合物及方法”]。小细胞，通常包括细菌细胞膜，有可能含有有毒物质，例如，来自革兰氏阴性菌存在于外膜的内毒素类(脂多糖类)或来自革兰氏阳性菌存在于细胞壁的肽聚糖，所以这些微细胞可能引起各种副作用，诸如全身性炎症、败血症等。

原生质体是完全去除细胞壁的细菌、古细菌、真菌、植物细胞。细胞壁的去除可通过酶，诸如细菌或古细菌细胞的溶菌酶，真菌细胞的壳多糖酶及植物细胞的纤维素酶、果胶酶和/或木糖聚酶。原生质体可用于研究膜生物学，包括大分子及病毒的摄取。另外，原生质体应用于DNA转化以获得转基因生物。使用称为原生质体融合的技术，原生质体还可用于植物育种。然而，迄今为止还未报道来自原生质体的微泡及其应用。

发明内容

技术问题

根据本发明，本发明人进行了DDS的精细及深入研究，目的是克服现有技术中遇到的问题，发现了来自已去除其细胞壁的细菌、古细菌、真菌或植物细胞的微泡，可用于有效地递送治疗物质及诊断物质或疫苗至特异性细胞或组织。

因此本发明的一个目的在于提供包括来自细胞原生质体的微泡的组合物。本发明的另一个目的在于提供包括微泡的药物组合物，所述微泡负载用于诊断、治疗、接种疫苗、靶向或与靶细胞的细胞膜融合，及减少副作用及改善体内外稳定性的必要的物质。本发明的另一个目的在于提供用于递送治疗物质、诊断物质和/或疫苗物质的组合物，所述组合物包括来自细胞原生质体的微泡。本发明的还一个目的在于提供使用微泡、包含微泡的物质递送系统，及诊断疾病的包含微泡的试剂盒递送物质至特异性靶标的方法。

然而，在本发明中实现的技术目标不限于上述那些，且本领域技术人员可从以下描述中清楚地理解其他目的。

技术方案

根据一方面，本发明提供了包括来自细胞原生质体的微泡的组合物。本发明可用的细胞可选自由细菌细胞、古细菌细胞、真菌细胞和植物细胞组成的组。

根据另一方面，本发明提供了包括来自原生质体的微泡的药物组合物，所述微泡负载治疗物质或诊断物质。

根据另一方面，本发明提供了包括原生质体微泡的药物组合物，所述微泡负载疫苗物质。

本发明的微泡能够将治疗物质、诊断物质和/或疫苗物质运送至特定组织或细胞，其可用于预防、治疗和/或诊断目的疾病。对微泡内负载的物质没有赋予特别限制。负载的治疗物质、诊断物质和/或疫苗物质可自然表达或通过细胞中转化用作微泡的来源，或从细胞外导入。

根据还一方面，本发明提供了用于递送疾病的诊断、治疗和/或疫苗物质的组合物，所述组合物包括来自原生质体的微泡。

根据还另一方面，本发明提供了疾病的诊断、治疗和/或疫苗物质的递送系统，所述系统包括来自原生质体的微泡。

根据又另一方面，本发明提供了一种来自原生质体的微泡的制备方法，所述方法包括：去除细胞的细胞壁以提供原生质体；在细胞悬浮液中构建微泡；及从悬浮液中分离微泡。