[发明专利]将至少一种用于治疗和/或诊断用途的化合物包封在红细胞内的设备及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及用于在红细胞内引入至少一种化合物的设备、试剂盒、用途和方法。

背景技术

近来，许多尝试集中在开发在患者体内特定位点处药剂靶向释放或取得在患者体内的药物缓释的程序。已知，在药物有效到达适当的靶位时或当药物优选在待治疗的器官或在待治疗的细胞内释放时，可以增加药物的有效性。此外，当给药药物总量最小化，但由于药物缓慢释放而保持其治疗作用时，药物的毒性可以降低。对于给药系统的关注既涉及大部分为相对简单的有机分子的常规制剂，也涉及更复杂的药学活性剂，如肽、蛋白质、酶、抗体、反义寡核苷酸、诱饵寡核苷酸、细胞因子、核酸和它们的组合等。

最近的关注领域涉及红血球(下文中称为“红细胞”或“RBC”)作为载体用以在患者体内的期望位点或在血液循环中低剂量释放治疗剂量的药物的用途。可利用特定方法使红细胞“加载”生物活性剂，在该方法中使得红细胞的细胞膜具有渗透性，将一种或更多种制剂加入红细胞中，然后再密封该细胞膜。这些“加载的”或“经处理的”红细胞作为药物释放系统和靶向系统提供有几个优点，即它们是生物可降解的，可在循环中保持很长一段时间，并且可以靶向细胞例如巨噬细胞。

制备负载在生理溶液中的细胞悬浮液的方法公开在德国专利号2326244和德国专利申请公开号(0S)2326161和2495119，其中红细胞的细胞膜分别通过渗透压和电场被溶解。

论文“Erythrocytes as carriers of primaquine-preparation：characterization and evolution″(Naresh Talwar et al.；Journal ofControlled Realease，20(1992)133-142)公开了在红细胞内包封磷酸盐。指出所建议的方法涉及红细胞的溶解以及洗涤经处理的红细胞。然而，其中没有提到或建议经处理的红细胞的浓度必须和/或能够增加。

美国专利4,224,313(Zimmermann等人)公开了一种通过外部诱导的渗透压或电场或两者来制备细胞膜渗透性增加的悬浮在溶液中的大量加载细胞的方法。待加载的材料包括具有在被引入细胞内时提前破坏细胞膜的能力的药剂和能够抑制药剂与细胞膜的反应的稳定剂。

美国专利4,.478,824(Franco等人)公开了一种将物质引入红细胞内方法，利用能够穿过细胞膜并通过扩散进入细胞内的化学剂例如DMSO和甘油来改变红细胞的内部渗透压。

美国专利4,652,449(Ropars等人)公开了一种利用渗透压将物质引入红细胞内的方法和设备。该方法和设备已被采用并且仅用于测试大量血液。这使得许多应用被限制为采用自体血，即血来自随后接受加载有药物的血液的同一患者。

美国专利N.4,931,276(Franco等人)公开了一种用于在红细胞中包封非离子制剂方法。在期望待引入的制剂不是阴离子的，或者是阴离子或多阴离子的但不是在几乎等渗的水剂中以足以使得细胞渗透性产生所需的增加而不破坏细胞的浓度存在时，该方法具有有限的有效性。

Heubsch等人，J.Cell.Physiol.，122：266-272(1985)表明在渗透溶胀的细胞中，形成膜的双脂层与细胞的细胞骨架分离，并且细胞的尺寸显著改变并变为球形。这在正常情况下不会发生。

专利申请公开号EP1466968公开了一种用于在红细胞中包封活性物质的方法和机器。

对于在细胞中引入物质的方法的综述由Franco等人在Life Science32：2763-2768(1983)、AM.J.Hematol.17：393-400(1984)、e J.Physiol.129：221-229(1986)中给出。

尽管红细胞作为药物释放系统的用途已有许多研究，但是用于实施这些方法学的方法和设备尚未被开发至正常应用于临床实践、诊断和研究的程度。

此外，发展到现在的方法和设备的灵活性不足以允许获得在治疗、诊断和研究领域中的任何类型用途中使用的红细胞。特别是，根据现有技术中公开的程序，通常不可能得到能够实际用于诊断(或治疗)领域的产品。

用于在红细胞内包封化合物的设备的近期实例还公开在专利US6139836中。虽然该设备相对于现有技术代表了相当大的改进，但是该设备相对复杂、昂贵并且难以使用。在这方面，应该指出的是，专利US6139836的设备的操作需要专门操作人员的存在和持续干预，该操作人员必须以正确的顺序操作设备的不同部件。因此，红细胞的处理(加载)相对耗时并涉及操作人员犯错的风险。