[发明专利]融合蛋白

说明书

【技术领域】

本发明涉及核酸分子和能同时和选择性地与胶原和CD133蛋白结合的多肽。本发明也涉及含有本发明的核酸分子的宿主细胞。而且，本发明涉及产生本发明的多肽的方法。多肽可用于预防，治疗或诊断心血管疾病。因此，本发明也涉及含有本发明的多肽，其是优选二聚体的药物组合物。

【背景技术】

内皮祖先细胞（EPC）居住在骨髓及释放到血流，在这里它们涉及止血和组织修复。CD133蛋白，长效五羟淀粉跨膜糖蛋白，在EPC表面表达，在这里EPC分化为内皮细胞后表达下调。CD133不在血的任何其他细胞类型上表达，这使其成为EPC募集的有吸引力的靶标。

从WO 2008/101700知道能将内皮祖先细胞（EPC）吸引到血管损伤位点的双特异性蛋白。由WO 2008/101700公开的蛋白含有能以高亲和性结合EPC上的CD133的部分。而且，由WO 2008/101700公开的蛋白含有部分能识别及结合血管的内皮衬中的损伤。根据WO2008/101700，通过连接能结合内皮前体细胞的第1蛋白和能结合胶原的第2蛋白来制备蛋白。

第1和第2蛋白通过使用SPDP（N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)-丙酸酯），其是异双官能交联剂来连接。由于第1蛋白含有与SPDP具有反应性的约25个赖氨酸残基，及第2蛋白含有约18个赖氨酸残基，可能的二聚产物数是至少450（18×25）。此外，更高寡聚体的形成不可避免。因此，交联的产物含有产物的异源混合物。顺便而言，混合物不含有任何第1和第2蛋白的融合蛋白，由于产物未通过编码第1和第2蛋白的2个或更多基因的接合来制备。

因此，无由WO 2008/101700可利用的产物可被认为是融合基因的翻译产物或作为具有源于各原蛋白的功能性质的单多肽。

由WO 2008/101700公开的蛋白混合物不合适于用作药物，由于混合物不可以标准化的及定义的组成和对于治疗性应用适合的足够的纯度提供。而且，由于寡聚体不可避免，WO 2008/101700的混合物的产率和功效有问题。

另一方面，制备含有在WO 2008/101700的混合物中存在的多肽序列的融合蛋白的尝试不能结合能选择性地和同时结合内皮前体细胞和胶原的第2蛋白。

【发明概述】

因此，本发明的目的是提供能同时和选择性地与胶原和CD133蛋白结合的小尺寸多肽，其中可以高产率和高纯度制备在药物组合物中有用的蛋白，用于由EPC分化为血管壁的内皮细胞直接或由阳性调节因子的分泌间接改善治愈过程。

本发明提供编码特定融合蛋白的核酸分子。融合蛋白可通过EPC归巢到暴露的胶原用于治疗或预防心血管疾病，或用于诊断目的。

根据第1方面，本发明提供分离的核酸分子，其选自：

i．包含与SEQ ID NO:1的核苷酸序列或其补体具有至少85%同一性的核苷酸序列的核酸分子；

ii．包含SEQ ID NO:1的核苷酸序列，或其补体的至少1500个连续核苷酸的片段的核酸分子；

iii．编码包含与SEQ ID NO:2具有至少85%同一性的氨基酸序列的多肽的核酸分子；

iv．编码包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽的片段的核酸分子，其中所述片段包含SEQ ID NO:2的至少500个连续的氨基酸；以及

v．编码包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽的变体的核酸分子，其中所述核酸分子在6.0×SSC中于45℃温育、之后是在0.2×SSC/0.1%SDS中于65℃洗涤的条件下与包含整个SEQ ID NO:1的核酸分子，或其补体杂交。

SEQ ID NO:1的核酸序列如下：