[实用新型]C反应蛋白时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种用于C反应蛋白(CRP)定量检测的C反应蛋白时间分辨荧光免疫层析试纸条。

背景技术

目前的免疫层析(lateral flow immunoassay，LFIA)快速检测试纸条多以胶体金、彩色乳胶微粒或者荧光素作为标记物。基于胶体金标记技术开发的快速检测产品，存在灵敏度低，只能定性或者半定量，批间差异较大等问题；彩色乳胶微粒虽然批间差有所改进，但灵敏度依然较低，也只能定性或半定量；基于荧光素标记技术的免疫层析灵敏度有了较大提高，也能进行定量检测，但是由于样本中含有较高的荧光本底信号，且stock位移较小，会对检测产生较大的影响。

时间分辨荧光(Time-resolved Fluorescence，TRF)是一种非同位素荧光标记物，与普通荧光相比，具有stock位移大，荧光寿命长等特点，可以有效的避免样品中的本底荧光，以及激发光等杂散光的影响，因此相比普通荧光具有更高的灵敏度和抗干扰能力。

本实用新型将时间分辨荧光乳胶微球标记和免疫层析两大技术结合，得到时间分辨荧光免疫层析法(Time-resolved Fluorescence lateral flow immunoassay，TRF-LFIA)，开发出能够精确定量的快速免疫层析检测试纸条。

同时，本实用新型对于传统的免疫层析膜组合方式进行了改进，将原有的四层甚至五层膜系统改变成三层膜系统。

传统的免疫层析膜组合方式包括样品垫、滤血膜、结合垫、分离膜(硝酸纤维素膜)、吸水垫等四到五层(四层则没有滤血功能或者将滤血功能与样品垫功能组合)。

GE公司旗下Whatman开发了具有五合一功能的膜Fusion5，集合了上述五种膜的功能，但Fusion5由于孔径较大，抗体难以固定，需要制备特殊的Stone用于固定抗体，生产工艺较为复杂，仪器设备要求较高，开发的免疫层析试剂只能用于定性检测。

本实用新型利用Fusion5替代传统的样品垫、滤血膜、结合垫，将原有的四层甚至五层膜系统简化，开发出只需要三层膜结构的快速定量免疫层析检测试纸，不仅使生产工艺得到了简化，并有效的降低了产品的批内差和批间差，极具实用价值。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种新型的、能快速定量检测C反应蛋白(CRP)的C反应蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试纸条。

本实用新型的技术方案为：一种C反应蛋白时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条，包括Fusion5膜、硝酸纤维素膜以及吸水纸三部分，硝酸纤维素膜位于中间，Fusion5膜与吸水纸分别搭接于硝酸纤维素膜左右两端，Fusion5膜上设有加样区和微球区，硝酸纤维素膜上设有包被有C反应蛋白抗体的检测线(T线)和包被有亲和素或链霉亲和素的质控线(C线)。

该试纸条Fusion5膜上远离硝酸纤维素膜的一端设有加样区，接近硝酸纤维素膜的区域设有微球区。所述微球区上载有时间分辨荧光微球，包括检测微球和质控微球，检测微球为表面包被有C反应蛋白抗体的荧光微球，质控微球为表面包被有生物素标记蛋白的荧光微球。

进一步的，所述C反应蛋白抗体为C反应蛋白的单克隆抗体或多克隆抗体。

优选的，所述时间分辨荧光微球粒径范围为100～1000nm。

所述荧光微球中填充了镧系元素化合物；较优的，该镧系元素螯合物为铕螯合物；最优的，该铕螯合物可为Eu(TTA)₃/TOPO或Eu(TTA)₃/Phen。

所述生物素标记蛋白可以是任何一种不影响生物素/链霉生物素与亲和素的结合，并可被生物素标记的蛋白。

较优的，所述蛋白可以是牛血清γ-球蛋白(BGG)或小牛血清白蛋白(BSA)。

硝酸纤维素膜上，T线和C线相互平行，T线靠近加样孔端，C线远离加样孔端。

优选的，所述时间分辨荧光免疫定量检测试纸条底部设有塑料底板。

本实用新型的C反应蛋白试纸条通过双抗体夹心法原理测定C反应蛋白(CRP)。实验证实，本实用新型的C反应蛋白时间分辨荧光免疫层析试纸条灵敏度高，批内差及批间差小，有较好的重复性，可同时检测全血、血清、血浆、尿液样本，250mg/dL血红蛋白、500mg/dL甘油三酯、10mg/dL胆红素对本实用新型的试纸条的检测无影响，远超过市场上大多数免疫层析快速诊断产品。

附图说明