[发明专利]优质多花黄精试管苗快速繁殖方法

说明书

技术领域：

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是优质多花黄精试管苗快速繁殖方法。

背景技术：

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)系百合科黄精属药用植物，其根茎作中药黄精用，含多糖、氨基酸、蒽醌类化合物等成分，具有抗菌、降压、抗衰老及治疗风湿痛等作用。在我国南方的一些地区有栽培，其主要靠根茎的无性生殖和种子进行繁殖，但由于繁殖系数低和种子繁殖周期长速度慢，无法提供大量种苗，因而大面积种植受到限制。此外，长期无性生殖易造成种质性状退化，影响着品种的遗传稳定性。利用组织培养方法繁殖多花黄精，可有效地提高其品性，增加繁殖系数，缩短培育周期。

目前，有关多花黄精的组织培养和快速繁殖的报道多是基于芽体进行的，且组培体系的方法步骤为：外植体的选取、预处理和消毒→诱导培养基培养→增殖培养基培养→增殖壮苗培养基培养→生根培养基培养。

对于外植体的选取、消毒，徐忠传等2006先将取回的野生黄精根茎在清水中洗掉泥土后，再用洗衣粉浸泡30min，自来水冲洗，再在无菌操作台上用0.15％升汞消毒10min，灭菌去离子水洗涤4次，切去切口后接到诱导培养基上。刘红梅等2010是将黄精根茎从土中挖出后，洗去泥土，用刀切取带芽根茎于洗洁精水溶液中浸泡30min，之后洗净，用75％乙醇擦洗，再用洗洁精浸泡5min，自来水冲洗；再在无菌操作台上采用重复2.5％次氯酸钠5min，灭菌去离子水刷洗2次过程三次进行，最后用无菌滤纸吸干水分，用刀切去伤口坏死部分接种诱导培养基。对于之后的诱导培养基培养，前人研究主要集中在培养基成分的不同上，徐忠传等2006采用的诱导培养基为MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L，刘红梅等2010认为2，4-D比NAA更有利于多花黄精的不定芽诱导，杨玉红2011认为6-BA对诱导黄精愈伤组织生长效果显著，2，4-D、NAA和KT效果不显著。

在无菌操作台上用0.15％升汞消毒10min，灭菌去离子水洗涤4次或在无菌操作台上采用重复2.5％次氯酸钠5min，灭菌去离子水刷洗2次过程三次进行目前皆作为常规的消毒技术。

对于增殖培养基培养，徐忠传等2006是将诱导所得丛芽切成2-3株一丛(即2-3个芽体)后，接种于系列增殖培养基进行增殖的，培养基成分上，徐红梅等2003认为激素组合TDZ 1.5mg/L+2，4-D1.0mg/L对黄精根茎芽增殖最有利，徐忠传等2006认为激素组合6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L不仅能使芽快速增殖，且不定芽增殖的综合质量好，无畸形叶片产生。对于壮苗生根培养阶段，徐忠传等2006是将分化丛芽接种培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，30d后将丛芽分开，取健壮单个根茎芽，再接种于MS+NAA0.5mg/L生根培养基上。总之，现有研究只局限于利用芽体培养，对于后期种苗的生长速度较慢，无法满足优质黄精种苗的规模化生产。

发明内容：

本发明的目的基于上述技术背景，采用了消毒前的预处理，结合研究了培养基中糖分浓度和生长调节剂多效唑浓度对多花黄精块根部分和芽体部分增殖的影响，以提供多花黄精块根增殖的培养基组合物配方及其应用，进一步提供优质多花黄精试管苗快速繁殖方法。满足优质黄精种苗的规模化生产。

本发明解决其技术问题采取的技术方案：包括培养基的配制；繁殖方法的步骤为：外植体的选取、预处理和消毒→诱导培养基培养→增殖培养基培养→增殖壮苗培养基培养→生根培养基培养；各组培阶段的培养条件是：温度25±2℃、光照时间12h/d，诱导阶段采用散射光，增殖、壮苗和生根阶段光照强度2000Ix；其特征在于：

(一)培养基的配制：

各种培养基配方为：

(I)诱导培养基MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA；

(II)带芽块根的增殖培养基MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+糖60g/L；

(III)芽体部分增殖培养基MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L 2，4-D+糖60g/L；

(IV)块根部分增殖壮苗培养基MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+多效唑0-50mg/L+糖60g/L；

(V)块根部分生根培养基MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.5％活性炭；以上I-V号培养基pH均介于5.6-5.7之间；

(二)繁殖方法的步骤为：