[发明专利]一种检测多种有机磷农药残留的酶联免疫层析方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及农药检测技术领域，特别涉及一种检测多种有机磷农药残留的酶联免疫层析方法及试剂盒。

背景技术

农药残留是指农药使用后残存于生物体、食品(农副产品)和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。农药通过直接或间接途径(大气、水、土壤)对食品造成污染。人类处于食物链的最顶端，所受农药残留生物富集的危害也最严重。现今农药残留已成为中国膳食中的主要食品安全性问题。严重污染食品的农药主要是有机磷、有机氯、氨基甲酸酯类和拟除虫菊酯类的杀虫剂、杀菌剂和除草剂。世界上农药常用品种约500种，我国的农药品种只有200多种。

有机磷农药已有70多年的历史，并仍被广泛使用。常用的有机磷农药有乐果、氧化乐果、甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷等。根据美国《食品质量保护法》的规定，有机磷农药被美国环保局列为最先接受再登记和残留限量再评价的一类农药。批准登记的有40种，久效磷、速灭磷等有机磷农药已被严格禁止施用。

由于有机磷农药对于防治农业病虫草害具有经济、高效、方便等特点，使其在农药中占有重要地位，并且在今后相当长一段时间内仍被广泛使用。但有机磷农药的高残留性，已经引起社会的高度重视，也制定了较为严格的限量标准。1998年，我国上海市就已全面停止供应和使用甲胺磷农药。据统计，1999～2001年，对广西7个主要城市的蔬菜市场的21个蔬菜品种进行分析，有近50％的样品有机磷检测呈阳性反应。可见，有机磷农药仍被广泛的使用，但是它与人们的身体健康有密切关系，需要引起高度的重视。

残留的有机磷农药对人体内的胆碱酯酶有抑制作用，能阻断神经递质的传递，造成组织中乙酰胆碱的积聚，其结果引起胆碱能受体活性紊乱，并使有胆碱能受体的器官功能发生障碍，主要出现两类症状。凡由脏器平滑肌、腺体、汗腺等兴奋而引起的症状，与毒覃中毒所引起的症状相似，则称为毒覃样症状；凡由交感神经节和横纹肌活动异常所引起的症状，与烟碱中毒所引起的症状相似，故称烟碱样症状。

有机磷农药中毒的途径可通过皮肤进入人体；在喷洒过程中产生的气雾可由呼吸道吸入；误服者可由消化道吸收。其潜伏期也因中毒途径不同而有所差异，经口服者约5～20分钟早期出现恶心、呕吐，以后进入昏迷状态；经呼吸道者，潜伏期约30分钟，吸入后产生呼吸道刺激症状，呼吸困难，视力模糊，而后出现全身症状；经皮肤吸收者潜伏期最长约2～6小时，吸收后有头晕、烦躁、出汗、肌张力减低及共济失调等症状，严重的可以导致死亡。

20世纪80年代以来，我国蔬菜和水果农药残留引起人畜中毒死亡事件频繁发生。据统计，1981年全国农药中毒人数28.9万，死亡1.87万，1985年全国农药中毒人数10.7万，死亡1.25万；近10年来，我国平均每年中毒人数约10万，死亡1万多人。其中1992年至19％年全国26个省市发生农药中毒事件247349例，死亡24612人，我国每年因农药中毒的人数占世界同类事故中毒人数的50％。据农业部2000年底对我国14个省会城市2110个样品的检测结果，蔬菜中农药超标高达31.1％，其中北京、天津、上海、广州、南宁、昆明等大城市蔬菜农药残留超标率超过50％。

由此可见，农药残留对人体健康危害极大，故研究农药残留快速、高效的检测方法，对保证食品安全和加强食品中农药残留量的检测和监督管理具有重要意义。

农药残留分析技术始于20世纪，最初的农药残留检测技术仅限于化学法、比色法和生物测定法，检测方法缺乏专一性，灵敏度也不高。20世纪60年代气相色谱法(GC)应用于农药和药物残留分析，大大提高了农药和药物残留量的检测水平。20世纪80年代以来，高效液相色谱法(HPLC)开始广泛应用于对热不稳定和离子型农药及其代谢物的分析。色谱法虽然定量准确、灵敏度高，但所需设备昂贵，需要专业人员操作，且分析时间长不利于现场监测。