[发明专利]一种定量检测心肌肌钙蛋白T的荧光免疫层析方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验领域，特别涉及一种利用心肌肌钙蛋白T相关的免疫反应及荧光免疫层析技术，以早期、敏感、特异的定量检测急性心肌梗死。

背景技术

当前，心血管疾病在世界范围内已成为成年人最大的潜在杀手，仅在美国就有超过7000万人患有心脏病，每年大约有600万人因胸痛而进急诊室，每年急性心肌梗死的死亡人数超过了50万，在我国，心血管疾病的患病率、发病率及其危险因素水平均呈不断上升趋势。近年来统计，心血管病的死亡率在人口死亡中占40％，已高于欧美国家，属心血管病高发国。因此，只有做到早预防、早发现及早救治，才能最大限度的防止致残、致死后果，最大限度的改善心血管患者的预后和生活质量。

对心血管疾病，传统的实验室检测多为心肌酶谱系列。然而近年来研究发现，它对急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)的诊断存在着不足之处，如：血液中酶活性升高出现较晚、持续时间短及特异性较差等。因此，20世纪90年代以来，临床化学家们逐渐将诊断AMI的研究重点转移到心肌蛋白标志物上。其中心肌肌钙蛋白(Cardiac troponin，cTn)是唯一存在于心肌中的收缩蛋白，对心肌坏死具有高度的敏感性和特异性。

肌钙蛋白是肌肉收缩的调节蛋白，由三个结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T  (TnT)、肌钙蛋白I(TnI)和肌钙蛋白C(TnC)。肌钙蛋白具有的3种同分异构体，其中两种同分异构体是骨骼肌所特有的，一种同分异构体是心肌所特有的，这3种肌钙蛋白的同分异构体存在着结构上的差异。心肌中的T和I亚基结构不同于其它肌肉组织，且由于分子量小，发病后血中浓度将迅速升高。其中，心肌肌钙蛋白T(cTnT)在3～6小时超过参考值上限值，10～24小时达峰值，升高倍数可达30～200倍，而CK-MB最高仅为5～20倍，此外可持续10～15天才恢复正常。即出现早，和CK-MB相当或稍早；消失慢，持续时间超过LD1，诊断的窗口期特别长，兼有CK-MB和LD1的优点。cTnT的灵敏度为50％～59％(0～6小时)，特异性达74％～96％。据报道cTnT在诊断AMI时比CK-MB、LD1/LD2比率更为灵敏，且由于消失慢，可作为心肌梗死后期标志物。另外，cTnT亦可作为心脏手术中心肌梗死症状出现的指示物，当病人接受动脉搭桥手术时，若cTnT含量增加，表明出现心肌梗死，而此时CK-MB含量并无变化。

目前，多采用化学发光法、酶联免疫吸附法及胶体金免疫层析法等测定血清中的cTnT。但化学发光法对技术要求高，不易在临床实验室中进行常规开展；酶联免疫吸附法操作复杂，检测耗时长；胶体金免疫层析法虽然具有样品用量少，简便快速，便宜的优势，然而当遇到某些样品中目标分析物含量较低时，胶体金的颜色将很浅，很难用肉眼来判断结果，容易出现误判，灵敏度低。

中国专利申请号201010197148.0披露了一种肌钙蛋白I和肌钙蛋白T的双通道检测卡，该申请号专利利用胶体金标记不同目标物的抗体，肉眼观察检测结果，实现肌钙蛋白I和肌钙蛋白T的同时检测。该申请号专利只能进行定性检测，而不能实现定量检测；检测结果通过肉眼进行观察，受主观影响较大，特别是对于目标分析物含量较低的样品，同一试纸条不同的检测者可能会做出不同、甚至错误的结果判断。

中国专利申请号200710056485.6公布了一种吖啶酯和碱性磷酸酶化学发光免疫分析检测心肌钙蛋白T的超敏感方法。该申请号专利采用吖啶酯和/或碱性磷酸酶作为标记物，它们为间断的、闪烁性发光，在反应过程中易发生裂变，进而导致反应结果不稳定。此外，该方法还具有操作步骤多，测试成本高的缺点。

在免疫层析系统中，除胶体金、胶体硒、乳胶颗粒及碳颗粒以外，量子点亦可被用作可视或可被仪器检测的指示物质。它具有发光强度高、激发光谱宽、发射光谱窄、荧光寿命长、表面修饰多功能化及稳定性好等众多优点，在荧光检测领域具有取代传统有机荧光染料的潜力，已成为新一代生物荧光标记物。对胶体金免疫层析而言，定性/半定量分析是依据胶体金颗粒对光的吸收和散射进行检测的。与检测荧光强度相比，具有灵敏度低、定量不准确等缺点。

因此，基于量子点及免疫层析的诸多优势，需要研制一种利用量子点来检测心肌肌钙蛋白T的方法，弥补现有技术中检测心肌肌钙蛋白T灵敏度低、定量不准确或操作步骤繁琐、成本高的不足之处。

发明内容

本发明要解决的技术问题为针对现有技术中检测心肌肌钙蛋白T灵敏度低、定量不准确的缺点，提供了一种定量检测心肌肌钙蛋白T的荧光免疫层析方法及其试剂盒。