[发明专利]兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体的制备与应用

权利要求书

1.兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体的制备，其特征在于如下步骤：

步骤(1).经DNAStar软件分析后，将人的α-乳清蛋白N端第122                                               141位的20个氨基酸作为兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体抗原表位，氨基酸序列如下：

TyrTrpLeuAlaHisLysAlaLeuCysSerGluLysLeuAspGlnTrpLeuCysGluLys；

步骤(2).用多肽自动合成仪合成人的α-乳清蛋白多肽并纯化，纯化后与载体蛋白KLH偶联，形成人的α-乳清蛋白多肽-KLH复合蛋白；

步骤(3).将人的α-乳清蛋白多肽-KLH复合蛋白乳化，乳化后在兔腹部皮下多点注射，先后注射三次，每次间隔710天；

步骤(4).第三次注射1012天后，收集、分离得到含有兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体的血清，ELISA检测血清中兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体的效价，

所述的兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体，其效价在1:60000以上；

步骤(5).将步骤(2)合成并纯化后的人的α-乳清蛋白多肽与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联，形成多肽亲和层析柱；

步骤(6).将含有兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体的血清加入到步骤(5)制备的多肽亲和层析柱中，并在4℃孵育过夜后，洗脱抗体，得到兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体；

所述的步骤(2)人的α-乳清蛋白多肽的纯化，采用HPLC，可使人的α-乳清蛋白多肽的纯度达到95%以上；

所述的步骤(6)中兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体的纯化，采用免疫亲和纯化的方式。

2.根据权利要求1所述的兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗体的制备后的应用，其特征在于：该抗体可与人乳腺细胞的α-乳清蛋白发生特异性结合反应，可用于western-blot、免疫组化试验的要求。