[发明专利]一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法

权利要求书

1.一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的方法是以农杆菌为介导载体，以蓖麻子叶节为受体，通过予培养、农杆菌侵染、共培养、菌除、筛选和芽生根，得到具有可遗传目的基因的蓖麻植株。

2.根据权利要求1所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的蓖麻子叶节的选取方法是将蓖麻种子去掉外种皮后消毒、接种，待种子萌发后，选择胚轴和子叶均为淡黄色时期的萌发种子，切取子叶节。

3.根据权利要求1所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的农杆菌是LBA4404，内含pBI-121-RTA-RTA重复表达载体，pBI-121上带有卡那霉素抗性基因。

4.根据权利要求1所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的蓖麻子叶节预培养的培养基为1/8MS+ZT(8mg/L)+NAA(1mg/L)+蔗糖(20g/L)+琼脂粉(10g/L)，预培养时间为2天。

5.根据权利要求1所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的农杆菌侵染是用OD₆₀₀为0.5的农杆菌LBA4404，侵染预培养后的子叶节，侵染时间为20min。

6.根据权利要求1所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的共培养是将用农杆菌侵染完的子叶节接种到1/8MS+ZT(8mg/L)+NAA(1mg/L)+蔗糖(20g/L)+琼脂粉(10g/L)+乙酰丁香酮(100μM/L)的培养基中进行共培养，共培养时间为5天，在培养基上可见农杆菌单个菌斑为止。

7.根据权利要求1和3所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的除菌和筛选是将共培养后的子叶节接种到1/8MS+ZT(8mg/L)+NAA(1mg/L)+蔗糖(20g/L)+琼脂粉(10g/L)+23mg/L卡那霉素的培养基上，同时添加浓度为1.2g/L的头孢。

8.根据权利要求1所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的筛选是以浓度为23mg/L卡那霉素对除菌后的蓖麻子叶节进行处理，筛选时间为30天。

9.根据权利要求1所述的一种建立农杆菌介导蓖麻遗传转化体系的方法，其特征在于：所说的生根阶段培养基为1/16MS+蔗糖(20g/L)+琼脂粉(10g/L)，同时添加浓度为1.0mg/L的NAA，当抗性芽根发育良好后进行驯化移栽。