[发明专利]鸭传染性浆膜炎三价灭活疫苗的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于预防由1、2、4型鸭疫里默氏杆菌引起的鸭传染性浆膜炎的油乳剂疫苗制备方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer，RA)引起鸭的一种呼吸系统重要传染病。鸭传染性浆膜炎(Infectious serositis)是由鸭疫里默氏杆菌引起的鸭的一种慢性或急性败血性接触性传染性疾病，又称鸭疫里默氏杆菌病、新鸭病、鸭败血症、鸭疫综合症。主要侵害雏鸭、雏鹅、以及雏火鸡等多种雏禽，以2～7周龄鸭最易感，主要表现为浆膜炎、纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎等。由于本病的高死亡率和高淘汰率目前已经成为严重危害养鸭业的疾病之一。

对鸭疫里默氏杆菌的血清型分类始于1969年，Harry采用试管凝集试验鉴定出16个血清型(A～P)，几年后美国国立动物疾病中心采用沉淀试验鉴定出7个血清型，以阿拉伯数字命名为1～7型，考虑到命名的标准化以及将来新型的增加，1982年Bisgarrd建议用阿拉伯数字对血清型进行命名，将已有的血清型命名为1～13型。在此基础上Sandhu和Leister对血清型重新进行整理，加上新发现的血清型取名为1～17型，加上后来Lon等报道的18、19型和Pathansophon等报道的20、21型，至此世界上报道的RA血清型共有21型。2003年我国四川农业大学程安春教授等报道了22～25四个新的血清型，进一步丰富了该病的病原学的研究。由于各型毒力有所差异，型间交叉保护性极差或缺少，因此对某地区本病的预防，最好方法是制备与当地相关型疫苗，才能获得最佳的免疫效果。(程安春，等.我国鸭疫里默氏杆菌血清型调查及新血清型的发现.中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集，2004，453-457)。

发明内容

本发明的目的是采用免疫原性良好的鸭疫里默氏杆菌1型YBYN株、2型YBSD株、4型YBRA04株分别接种于适宜培养基，收获培养物，经甲醛溶液灭活后，加入油佐剂混合乳化制成。用于预防由1型、2型和4型鸭疫里默氏杆菌引起的鸭传染性浆膜炎。

一、生产用菌株

1.菌株来源

制造和检验用鸭疫里默氏杆菌1型YBYN株(从云南省鸭场病死鸭的肝脏分离)和2型YBSD株(从山东省鸭场病死鸭脑部分离)和4型YBRA04株(从山东省鸭场病死鸭心脏分离)已于2011年2月25日和2011年11月22日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号：YBYN株为CGMCC No.4615，YBSD株为CGMCC No.4614和YBRA04株为CGMCC No.5485。三株菌株均由本发明人分离、鉴定、保存和供应。

2.毒株特点

(1)形态  本菌为革兰氏阴性(G^-)小杆菌，有荚膜、无芽孢、无鞭毛，常单个存在，少数呈双排列，偶见呈长丝状排列，涂片经瑞氏染色，可见部分菌体两端浓染。

(2)生化特性  过氧化氢酶、氧化酶、精氨酸脱羧酶试验为阳性，能缓慢液化明胶，靛基质、VP、甲基红、柠檬酸利用、硝酸盐还原试验为阴性，不产生硫化氢，不发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖。

(3)培养特性  本菌在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上不生长。初次分离培养，需要供给5％～10％的CO₂。将本菌接种于巧克力琼脂、含3％小牛血清的胰蛋白胨大豆琼脂(改良TSA配方见附注2)，置5％～10％CO₂、37℃培养24～48小时，可生长出圆形微隆起、表面光滑、直径1～2mm无色素菌落。在5％绵羊鲜血琼脂平板上生长但不溶血。在含有3％小牛血清的胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，37℃培养24小时，呈上下一致轻微浑浊，管底有少量沉淀，无菌膜。

(4)血清型  YBYN株为血清1型、YBSD株为血清2型、YBRA04株为血清4型。

(5)最小致病菌量  能使10只1月龄健康易感鸭至少8只发病的最小致病菌量分别为：YBYN株为1×10⁹CFU、YBSD株为2×10⁸CFU、YBRA04株为2×10⁹CFU。