[发明专利]一种加压毛细管电色谱检测水产品中三聚氰胺的方法

权利要求书

1.一种加压毛细管电色谱仪检测水产品中三聚氰胺的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)样品制备：将水产品肌肉组织样品剪碎后均质，冷冻保存；

2)样品预处理：将样品经体积比为1.5～2.5∶1的质量浓度为0.8～1.2％三氯乙酸和乙腈混合液离心提取，MCX固相萃取柱净化，再经0.20～0.24μm滤膜过滤后供毛细管电色谱测定用；

3)配制三聚氰胺标准溶液；

4)采用加压毛细管电色谱进行分析：以反相键和C18为填料的毛细管电色谱柱作为检测柱；流动相采用9～11mmol/L，pH＝2.5～3.5的庚烷磺酸钠-柠檬酸溶液与乙腈的混合液，其体积比为80～70∶20～30；所加电压为-9～-11kv，柱压为9.0～9.2MP，柱温为常温，流动相的流速：40～60μL/min；进样量：0.9～1.1μL的工艺条件下，用紫外检测器在波长240nm处进行检测，同时绘制标准曲线；

5)将样品经检测分析后根据其保留时间进行定量分析，利用外标法根据其峰面积进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤2)中的三氯乙酸的质量浓度为1％，混合液中三氯乙酸与乙腈的体积比为2：1。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤2)中的离心提取的具体过程为：准确称取2±0.01g均质样品置于50mL离心管中，加入1％的三氯乙酸10mL，乙腈5mL，用涡旋混合器充分混匀1～2min，4000～6000r/min离心8～12min，收集上清液，再向原离心管中加入15mL体积比为2∶1的1％三氯乙酸和乙腈混合液重复提取一次，合并两次上清液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤2)的MCX固相萃取柱净化的具体过程为：用2～4mL甲醇活化MCX固相萃取小柱，再用4～6mL去离子水冲洗小柱，转移过多的甲醇，然后将提取液分次转移上柱，保持1.5～2.5mL/min的流速过柱，待上样液全部完成后，再依次用4～6mL水、2～4mL甲醇淋洗近干，最后用5～7mL4～6(v)％氨化甲醇溶液洗脱固相萃取小柱，分步洗脱，收集滤液并用氮吹仪吹干，用0.9～1.1mL流动相定容。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤3)的配制三聚氰胺标准溶液的步骤为：称取三聚氰胺标准品10.0mg±0.01g，用50％甲醇水溶液溶解并定容于100ml容量瓶中，配成质量浓度为100mg/L标准储备溶液。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤4)中庚烷磺酸钠-柠檬酸溶液的浓度为10mmol/L，pH＝3，流动相的配制过程为：取乙腈、重蒸水、20mmol/L庚烷磺酸钠-柠檬酸溶液按体积比为25∶25∶50的比列配成流动相，超声波脱气20～40min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述三聚氰胺标准溶液在检测前需用流动相稀释成0.2～5μg/mL的标准工作液。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述毛细管电色谱柱选用规格为EP-100-20/45-3-C18，内径100μm，有效柱长20cm，填料粒径3μm ODS。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤4)的电压为-10kv，柱压为9.1MP，流动相的流速：50μL/min；进样量：1.0μL。