[发明专利]一种产耐高温α-淀粉酶菌种的优化方法

权利要求书

1.一种产耐高温α-淀粉酶菌种的优化方法，包括下述的步骤：

a. 菌种的活化培养：将冷冻管保存的地衣芽孢杆菌10181菌种拿出活化，活化培养基：牛肉膏0.3～1.0%、蛋白胨0.7～1.5%、氯化钠0.1～0.8%、琼脂1.5～2.0%、余量为水，加热以上的组份至其溶解，调pH在6.5～7.5之间，装瓶包扎，在0.1Mpa下加热到120℃～122℃灭菌20～30min，冷却到15～50℃在无菌条件下倒平板或摆斜面，备用；由冷冻管菌种划线接种于平板培养基，27℃～30℃，培养1～2天；挑取单菌落36～40℃，培养1～2天，保存备用；

b.菌种的优化：将保存的菌种划线于淀粉平板培养基上：蛋白胨1～2%，酵母粉0.1～0.8%、牛肉粉0.1～0.8%、玉米淀粉0.5～1.8%、 葡萄糖0.1～0.5%、琼脂1.5～2.0%、余量为水，调pH6.5～7.5，在121℃下灭菌20～30min，36℃～42℃培养1～1.5天，选出淀粉水解圈大的单菌落，来进行种子扩培；

c.菌种的扩培：玉米淀粉5～10%，豆饼粉1～4%，硫酸铵0.1～1%，氯化钙0.02～0.08%，磷酸氢二钾1～2%，磷酸二氢钾1～2%，消泡剂0.02～0.08%、余量为水，调pH6.5～7.5，在121℃下灭菌40 min，将液体摇瓶种子液接入种子罐培养基中,接种量为1～5%，36℃～42℃培养1～2天；

d.发酵后提取：发酵结束后，发酵液脱色、经过板框过滤后，再经过超滤循环，制得液体酶制剂；脱色投料比为发酵液：活性炭＝90～100：1，搅拌转速：60～80rpm，脱色时间：1～1.5h；板框进料待出滤液后，先启动滤液上料泵打回流，滤液澄清后，打开袋式过滤器前的进料阀门，关闭回流阀，将滤液打往超滤循环罐；超滤浓缩工序：清洗：3～4bar条件下内循环10分钟，超滤：压力稳定4～5bar。

2.如权利要求1所述的一种产耐高温α-淀粉酶菌种的优化方法，包括下述的步骤：

a. 菌种的活化培养

平板培养基的配方：牛肉膏0.7%，蛋白胨1.2%，氯化钠0.5%，琼脂1.8 %、余量为水，加热以上的组份使其溶解，调pH在7.2，装瓶包扎，在0.1Mpa下加热到121℃灭菌30min，冷却到45℃在无菌条件下倒平板或摆斜面，备用；

接种与培养：由冷冻管菌种划线接种于平板培养基，38℃，培养30h；挑取单菌落接种于斜面培养基上，38℃，培养30h，保存备用；

b. 菌种的优化

淀粉平板培养基的配方：蛋白胨2%、酵母粉0.5%、牛肉粉0.7%、玉米淀粉1.8%、葡萄糖0.4%（单灭）、琼脂1.8%、余量为水，调pH为7.0， 121℃下灭菌30分钟，无菌室中倒平板，冷却备用；

优化与培养：将保存的菌种划线于淀粉平板培养基上，38℃培养30h，选出淀粉水解圈大的单菌落，来进行种子扩培；

c. 菌种的扩培

种子培养基配方：玉米淀粉10%、豆饼粉4%、硫酸铵1%、氯化钙0.05%、磷酸氢二钾2%、磷酸二氢钾2%、消泡剂0.05%、余量为水，调pH7.0，在121℃下灭菌时间40min，降温到36℃-42℃，备用；

种子的扩培：将液体摇瓶种子液接入种子罐培养基中，接种量2.5%,38℃通风搅拌培养40h，接入发酵罐中；

d.发酵后提取

发酵结束后，发酵液脱色、经过板框过滤后，再经过超滤循环，制得液体酶制剂；脱色投料比：发酵液：活性炭=90:1，搅拌转速：80 rpm，脱色时间： 1.5小时；板框进料待出液后，先启动滤液上料泵打回流，滤液澄清后，打开袋式过滤器前的进料阀门，关闭回流阀，将滤液打往超滤循环罐；

超滤浓缩工序： 清洗： 4bar条件下内循环10分钟，超滤：压力稳定5bar。