[发明专利]心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf1及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf1及其应用。

背景技术

脂肪酸结合蛋白(FABPs)是一组多源性的小分子细胞内蛋白质，分子量为12～16KDa，广泛分布于哺乳动物的小肠、肝、脂肪、心、脑、骨骼肌等多种细胞中。有小肠型(I-FABP)、心肌型(H-FABP)、肝脏型(L-FABP)、肾脏型(K-FABP)等亚型。不同型FABP的序列有较大的同源性。心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)分子量为14～15KDa，等电点(PI)为5.1，可将脂肪酸从细胞质膜向发生酯化和氧化的部位运输，从而进入线粒体的能量代谢体系之中，使脂肪酸在此氧化分解并最终生成三磷酸腺苷(ATP)，为心肌收缩提供能量。人H-FABP由132个氨基酸残基组成，在心肌中含量丰富，约占心脏全部可溶性蛋白的4％～8％，每克湿重心肌中含H-FABP约(0.52±0.06)mg。正常人的血浆和尿中不含有H-FABP或含量甚少。当心肌细胞受损时可快速释放到血和尿中。由于各型FABP具有各自特异的抗原决定簇，可以通过免疫学方法将H-FABP与其他型FABP相区分。随着FABP测定方法的研究和临床的应用，H-FABP已成为早期心肌损伤诊断的标志物(中国实验诊断学，2005年2月第9卷第1期)。

发明内容

本发明的目的是提供分泌心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一目的是提供心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体。

本发明的又一目的是提供心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的应用。

一株分泌心脏型脂肪酸结合蛋白的杂交瘤细胞株MCF1，与2011年9月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C201170。

所述的保藏号为CCTCC NO：C201170的杂交瘤细胞株MCF1分泌的心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf1。

所述的保藏号为CCTCC NO：C201170的杂交瘤细胞株MCF1分泌的心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf1在检测或纯化人心脏型脂肪酸结合蛋白中的应用。

所述的保藏号为CCTCC NO：C201170的杂交瘤细胞株MCF1分泌的心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf1在制备人心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂中的应用。

所述的人心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂优选检测检测人心脏型脂肪酸结合蛋白的Western Blot试剂、ELISA检测试剂、胶体金检测试剂。

一种检测人心脏型脂肪酸结合蛋白的胶体金试纸条，以权利要求2所述的抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf1做检测线抗体，羊抗鼠IgG作为质控线，胶体金标记的单克隆抗体mcf2作为显色抗体，按照常规方法制备组装得到；其中所述的单克隆抗体mcf2由保藏号为CCTCC NO.C201181的杂交瘤细胞株分泌的抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体。

一种检测人心脏型脂肪酸结合蛋白的双夹心ELISA试剂盒，包含辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体mcf2，抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf1包被的酶标板、PBST、TMB显色液、2mol/L H₂SO₄；其中所述的单克隆抗体mcf2由保藏号为CCTCC NO.C201181的杂交瘤细胞株分泌的抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体。

本发明的有益效果：

本发明利用纯化的人H-FABP(心脏型脂肪酸结合蛋白)作为免疫原，经过皮下免疫、常规细胞融合、筛选及克隆化，获得了一株能够稳定分泌抗H-FABP单克隆抗体的杂交瘤细胞株MCF1(CCTCC NO：C201170)。经ELISA、免疫印迹等方法鉴定，该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体mcf1能够特异性识别H-FABP(Hytest公司)，效价高、特异性强。

本发明H-FABP单克隆抗体mcf1的应用如下：

(1)应用该抗体可Western Blot检测心肌组织的H-FABP表达。

(2)应用该抗体可建立金标试剂盒快速检测各种体液如血液、血浆、血清、尿的H-FABP的水平。

(3)应用该抗体可建立ELISA检测试剂盒定量检测各种体液如血液、血浆、血清、尿的H-FABP的水平。

(4)应用该抗体制备免疫亲和层析柱，来分离纯化H-FABP蛋白。

(5)应用该抗体进行免疫组化检测心肌组织中H-FABP蛋白表达量。